HR8809 冰凍切片過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒
O32過氧化氫熒光探針具有極高的H2O2反應特異性,與其它類型的活性氧反應較少。在激發(fā)波長488nm,發(fā)射波長526nm附近,用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等檢測綠色熒光,從而測定細胞內(nèi)過氧化氫水平。...
冰凍切片過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒
產(chǎn)品編號:HR8809
產(chǎn)品組成:
組份 |
200T |
400T |
組份A:O32熒光探針 |
100μL |
100μL×2 |
組份B:10×清洗液B |
10mL |
20mL |
儲存條件:
探針-20℃避光保存;清洗液2-8℃保存,有效期6個月。
【注】:
● 探針短期內(nèi)經(jīng)常使用可以2-8℃保存。
● 長期不用-20℃保存。避免反復凍融??梢愿鶕?jù)需要分裝后凍存。
● 染色液A為DMSO溶液,冬季氣溫較低時為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養(yǎng)箱預熱,否者容易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
冰凍切片過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒產(chǎn)品說明:
過氧化氫(H2O2,Hydrogen peroxide)是體內(nèi)的一種活性氧(Reactive oxygen species, ROS)狀態(tài),參與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。
過氧化氫檢測試劑盒是利用過氧化氫特異性熒光探針過氧化氫探針O32檢測過氧化氫的試劑盒。過氧化氫探針O32是本公司合成的苯蒽類熒光探針,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內(nèi)后,與細胞內(nèi)過氧化氫反應,被氧化生成綠色熒光物質(zhì),綠色熒光強度與細胞內(nèi)過氧化氫水平成正比,檢測綠色熒光就可以知道細胞內(nèi)過氧化氫的變化情況。
O32過氧化氫熒光探針具有極高的H2O2反應特異性,與其它類型的活性氧反應較少。在激發(fā)波長488nm,發(fā)射波長526nm附近,用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等檢測綠色熒光,從而測定細胞內(nèi)過氧化氫水平。
產(chǎn)品特點:
● 使用方便:可用熒光顯微鏡直接觀察;
● 背景低,靈敏度高;
● 線性范圍寬,使用方便。
檢測方法:
● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦顯微鏡
樣本類型:
● 新鮮冰凍切片
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材:
● 熒光顯微鏡,激發(fā)波長488 nm,發(fā)射波長520 ± 10 nm,或者按照FITC熒光檢測條件檢測
● 離心機 ● 移液器 ● PBS緩沖液 ● 或者HBSS(無酚紅)
使用注意事項:
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開蓋時液體灑落。
● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間,以減少各種可能的誤差。
● 對于某些樣本,如果熒光太強,可以按照1:200-1:1000稀釋探針。探針標記的時間也可以根據(jù)情況在20-60分鐘內(nèi)適當進行調(diào)整。
● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間,以減少各種可能的誤差。
● 過氧化氫O32探針在光照和空氣中易被氧化,注意避光密封保存。
● O32染色工作液必須現(xiàn)配現(xiàn)用,并且在當天用完。
● O32對濕度非常敏感,若是O32溶液每次取完需要量后,必須緊緊密封蓋子。建議根據(jù)單次用量,分裝密封保存。不可使用含水的吸頭。
● 對不同的組織,應選擇合適的孵育時間和濃度,以觀察過氧化氫的變化,很多細胞內(nèi)的過氧化氫絕對水平較低,需要根據(jù)實際情況適當延長孵育時間。
● 過氧化氫O32探針可以根據(jù)需要的用量分裝后凍存,避免反復凍融。
● 過氧化氫O32探針不可以一次性全部稀釋后長期保存不用,稀釋后穩(wěn)定性變差,有效期縮短。
● 以下操作步驟僅供參考,請根據(jù)實際樣本情況調(diào)整。
冰凍切片過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒使用方法:
試劑配制:
1、根據(jù)樣本數(shù),用純水將O32過氧化氫熒光探針200倍稀釋,配成染色工作液。
2、用純水將10×清洗液10倍稀釋,配成1×清洗液工作液。
探針標記:
1、準備待測的厚為10μm 的未經(jīng)固定處理的冰凍切片。
【注】:
● 建議使用新鮮組織(手術(shù)切除后1小時內(nèi))制成的冰凍切片。
● 不新鮮的樣本可能檢測不到過氧化氫。
2、室溫下,小心加上200μL清洗液工作液,鋪滿整個切片表面,靜置5-10分鐘。
3、小心吸除清洗液。
4、滴加100μL染色工作液,在37℃培養(yǎng)箱避光孵育20-60分鐘。
【注】:
● 最好在濕盒中孵育,避免液體蒸發(fā)。
5、移除染色液。
6、用PBS洗滌切片2-3次。
7、加蓋玻片或甘油封片。
8、熒光顯微鏡檢測。
【注】:
● 染色完成后,立即進行熒光定性分析。
● 激發(fā)波長488nm,發(fā)射波長525nm。
● 熒光強,表明過氧化氫(H2O2)含量高。
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