SYA391 禽腺病毒單重熒光PCR檢測試劑盒

禽腺病毒單重熒光PCR檢測試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，我公司的禽腺病毒單重熒光PCR檢測試劑盒品質上佳，經過多年的開發(fā)生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括禽腺病毒單重熒光PCR檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：禽腺病毒單重熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號：SYA391
產品規(guī)格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對禽腺病毒特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對禽腺病毒DNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染動物的病原學診斷。

二、用途：
該試劑盒適合于檢測呼吸道分泌物棉拭子(感染I群禽腺病毒的雞、火雞、鵝、鵪鶉)、卵巢、輸卵管、卵泡、子宮和輸卵管粘膜組織、泄殖腔拭子(感染II、III群禽腺病毒的雞、鴨)等樣本中的禽腺病毒(AADV)，用于禽腺病毒(AADV)感染的輔助診斷及流行病學調查，其檢測結果僅供參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數量 規(guī)格
AADV反應液(AADV-qPCR MIX) 1管 720μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
AADV陽性對照(AADVPTC) 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
病死禽取卵巢、輸卵管、卵泡、子宮和輸卵管粘膜組織；活雞取呼吸道拭子或泄殖腔拭子，放于1ml 50％甘油生理鹽水中。
6.2 樣品前處理
組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；泄殖腔拭子直接取100μL提取。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博技有限公司生產的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產品，并按照相應試劑盒說明進行操作。
6.31 純培養(yǎng)物：取培養(yǎng)物50μL與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
6.3.2 糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，取50μL樣品，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
6.3.3 組織研磨液、拭子、血清、血漿及其他液體標本：取處理好的標本50μL，加入50μl DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
 注：陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(AADV-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 15μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(AADV-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃ 延伸時收集熒光信號 。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX 參比熒光。

八、結果分析
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)： 不應產生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(AADV-PTC)：均產生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足 ，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線，表明AADV核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明AADV核酸陰性。
（3） 如果Ct值＞35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行AADV 檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線，判為樣本陽性，表明AADV核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。


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