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產(chǎn)品詳情

SYA429 豬流行病腹瀉病毒

  • 產(chǎn)品/服務(wù):SYA429 豬流行病腹瀉病毒
  • 型 號(hào):SYA429
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價(jià):面議 
  • 更新日期:2023-06-29
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數(shù):954
產(chǎn)品簡(jiǎn)介

豬流行病腹瀉病毒是高品質(zhì)的動(dòng)物疫病PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面,本產(chǎn)品質(zhì)量好,且具價(jià)格,深為用戶稱道,了解更多豬流行病腹瀉病毒等動(dòng)物疫病PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購。...

產(chǎn)品詳細(xì)介紹

特別提示:包括豬流行病腹瀉病毒(PEDV)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!


產(chǎn)品名稱:豬流行病腹瀉病毒(PEDV)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):SYA429
產(chǎn)品規(guī)格:48次/盒|96次/盒



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名稱:禽傳染性法氏囊病病毒(IBDV)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào):SYA352
規(guī)格:48次/盒|96次/盒

名稱:禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)單重?zé)晒釶CR檢測(cè)試劑盒(定性/定量)
貨號(hào):SYA356
規(guī)格:48次/盒|96次/盒
一、簡(jiǎn)介:
本試劑盒用一對(duì)禽傳染性支氣管炎病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對(duì)禽傳染性支氣管炎病毒RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

二、用途:
該試劑盒適合于檢測(cè)氣管滲出物、支氣管和肺組織、腎臟或輸卵管等標(biāo)本中禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)RNA,用于禽傳染性支氣管炎病毒(AIBV)感染的輔助診斷及流行病調(diào)查,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

三、試劑盒組成:(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
禽傳染性支氣管炎熒光qRT-PCR反應(yīng)液(AIBV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
無核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
陰性對(duì)照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(AIBV-PTC 107copies/μL) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(AIBV-PTC 106copies/μL) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(AIBV-PTC 105copies/μL) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(AIBV-PTC 104copies/μL) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(AIBV-PTC 103copies/μL) 1管 50μL/管
陽性對(duì)照(AIBV-PTC 107copies/μL) 1管 50μL/管

四、儲(chǔ)存條件及有效期:
本試劑盒于-20℃以下保存,有效期為6個(gè)月。

五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測(cè)儀等。

六、樣品的采集與RNA提取
6.1 樣品的采集
按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)采集。標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-80℃,但不能超過6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。
6.1.1 血清:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,注入無菌的干燥玻璃管,室溫(22-25℃)放置30-60min,血標(biāo)本可自發(fā)完成凝集析出血清,或直接使用水平離心機(jī),3000rpm離心5min,吸取上層血清,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.2 血漿:用一次性無菌注射器抽取靜脈血2mL,注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二鈉)或檸檬酸鈉抗凝劑的玻璃管,立即輕輕顛倒玻璃管混合5-10次,使抗凝劑與靜脈血充分混勻,5-10min后即可分離出血漿,轉(zhuǎn)移至1.5mL滅菌離心管。
6.1.3 拭子、分泌物等樣品:在裝有拭子或分泌物的離心管中加入500μL PBS或生理鹽水,劇烈振蕩30s。棉拭子盡量擠出液體轉(zhuǎn)移到無RNA酶污染的離心管中,6000rpm離心20s,取上清備用。
6.1.4 病灶組織樣品:稱取組織約0.1g于研磨器或組織勻漿器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮),再加1mL生理鹽水研磨至無塊狀物,然后將樣品轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液于1.5mL滅菌離心管中。
6.2 RNA提取
可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的RNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進(jìn)行操作。
 注:陽性對(duì)照和陰性對(duì)照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對(duì)照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對(duì)照。

七、檢測(cè)步驟:
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光qRT-PCR反應(yīng)液(AIBV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1μL N×1μL
總量 15μL N×15μL
計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL,向每管中加入處理后樣品/陰性對(duì)照(NTC)/陽性對(duì)照(AIBV-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qRT-PCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實(shí)時(shí)熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription) 1循環(huán) 45℃ for 10 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM,淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析:
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測(cè)結(jié)果?;€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進(jìn)行調(diào)整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴(kuò)增曲線的zuì高點(diǎn)為準(zhǔn)。
8.2 試驗(yàn)成立判定
(1) 陰性對(duì)照(NTC):不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴(kuò)增曲線。
(2) 陽性對(duì)照(AIBV-PTC):均產(chǎn)生擴(kuò)增曲線。
(3) 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則,此次試驗(yàn)視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1) 在試驗(yàn)成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽性,表明SEA核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明SEA核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對(duì)于可疑樣品,先看擴(kuò)增曲線。如果擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對(duì)于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進(jìn)行SEA qPCR檢測(cè)。如果重復(fù)擴(kuò)增曲線為對(duì)數(shù)擴(kuò)增曲線,判為樣本陽性,表明SEA核酸陽性;否則判為樣本陰性。
(5) 標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)數(shù)值介于0.97~1之間。(相關(guān)系數(shù)數(shù)值等同于r2值),根據(jù)斜率及Y軸截距列出計(jì)算公式,并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品RNA含量拷貝數(shù)。
例如:Y軸截距=41.5 斜率=-3.83
公式為:Y=-3.83(logX)+41.5

九、注意事項(xiàng):
(1) 初次使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌,而且必須不含RNA酶。
(3) PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)等),防止實(shí)驗(yàn)室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺(tái)進(jìn)行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。



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