BTN81102 石蠟包埋組織RNA提取試劑盒

石蠟包埋組織RNA提取試劑盒的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，本制品用于科研目的，我公司的石蠟包埋組織RNA提取試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括石蠟包埋組織RNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：石蠟包埋組織RNA提取試劑盒
英文名稱：FFPE RNA Extraction Kit
產(chǎn)品貨號：BTN81102
產(chǎn)品規(guī)格：30次

石蠟包埋組織本是珍貴的分子生物學(xué)研究材料，但是由于它們的保存時(shí)間一般都比較長，很不容易從中提取到可以進(jìn)行PCR的RNA，存在的主要問題是RNA的降解和脫蠟過程中樣品的丟失。本產(chǎn)品是專門用于從甲醛和非甲醛固定的石蠟包埋組織中快提RNA的試劑

試劑盒特點(diǎn)：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和樣品RNA的丟失。
2.含一步離心式脫蠟試劑，不需要使用有毒的二甲苯，健康環(huán)保。
3. 能有效去除基因組DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反應(yīng)。
4. 即開即用，客戶自己不需要準(zhǔn)備額外的試劑。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀劑	30mL
RNase-free水	10mL
說明書	1份

儲存條件：低溫運(yùn)輸，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 將5片厚度為6-8μM的石蠟包埋組織切片轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管(zuì好使用螺旋蓋離心管)中并加入1mL溶液A，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振蕩器上以zuì大速度振蕩10秒。
3. 7000×g室溫離心2分鐘，溶液將形成兩個(gè)相，其中組織切片位于下相。
4.小心吸棄上層液體。
5. 將離心管放入真空離心機(jī)中抽干下層的液體，一般需要一小時(shí)。
6. 加入150μL溶液C，55℃保溫過夜。
7. 短暫離心，95℃保溫10分鐘。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震蕩半分鐘。
9. 加入0.1mL自備lǜ仿，振蕩器上充分振蕩混均30秒。
10. 13000-5000×g室溫離心3～5分鐘。
11. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機(jī)相(藍(lán)色)和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險(xiǎn)起見，可以留下100μL上清液不取。同時(shí)吸取上清時(shí)zuì好緩慢進(jìn)行，否則容易吸出交界面的不可見的DNA。
12.在上清液中加入兩倍體積的微量核酸沉淀劑，振蕩器上振蕩30秒混勻。
13. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側(cè)面將形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以將離心時(shí)間延長到20或30分鐘。
14.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL自備的75%乙醇，振蕩混勻30秒。
16. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
17.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
18. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
19.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千萬不要用真空離心法使RNA沉淀過于干燥，否則RNA將變得十分難溶。樣品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的電泳檢測：
21. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
22. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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貨號	名稱	規(guī)格
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名稱：細(xì)菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN51102
規(guī)格：100次
本試劑盒是在動物RNA提取試劑盒基礎(chǔ)上根據(jù)細(xì)菌提取的具體情況改良而得。它基于異硫氰酸胍/酚/lǜ仿提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各種常見的革氏陰性細(xì)菌。如果需要提革氏陽性細(xì)菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以選擇真菌RNA提取試劑盒。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作簡單快速，只要十分鐘左右,可以全在室溫下進(jìn)行。
2. 所得 RNA 質(zhì)量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 靈敏度高，可以從一個(gè)菌落中提取到普通電泳能夠檢測到的總 RNA。
4. 高于進(jìn)口同類產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
細(xì)菌RNA提取試劑	100ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5mL 新鮮細(xì)菌(注意:由于細(xì)菌RNA 半衰期十分短，所以，必須使用zuì新鮮細(xì)菌)，吸盡液體培養(yǎng)基，加入1mL細(xì)菌RNA提取試劑盒并用槍充分吹打，確保細(xì)菌全部裂解，沒有塊狀物。
 如果使用菌落，則用接種環(huán)小心將其轉(zhuǎn)移到裝有1mL細(xì)菌RNA提取試劑盒的1.5 m塑料離心管中，用移液槍吹打均勻。在細(xì)菌數(shù)較少時(shí)，建議使 用助沉劑 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL lǜ仿，在振蕩器上充分振蕩混均 30秒(必須將管底的液體振蕩起來，否則不能有效將DNA 打斷和去除蛋白質(zhì))。
3. 12000～15000g室溫離心3分鐘。上清液無色，下層液呈籃色，中間為蛋白質(zhì)。小心將上清液轉(zhuǎn)移到另一干凈 1.5ml塑料離心管中，上清液體積約為0.6mL。為避免觸及中間層的DNA和蛋白質(zhì)，建議分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。當(dāng)細(xì)菌數(shù)量較少時(shí)，中間層十分松散，上清時(shí)很容易吸到下層有機(jī)相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
5. 12000～15000室溫離心 3-10分鐘，RNA 將在管底側(cè)面形成沉淀。
6.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
7.在離心管中加入1mL 75%乙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
8. 12000～15000g室溫離心 1分鐘。
9.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
10. 重復(fù)第 8 到第 10 步一次。
11. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留液(約50μl)。
12. 短暫放 1-2分鐘后加入適量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃長期保存。
13. RNA 完整性的電泳檢測：
 如果需要做 Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是簡單檢測，可以使用TAE或百奧萊博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 兩用快速電泳液，但文獻(xiàn)報(bào)道必須使用變性上樣液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上樣液不含變性劑，也沒經(jīng)過去 RNase處理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)門BE 所含硼酸是研究多糖的經(jīng)典方法----硼酸絡(luò)合法中的關(guān)鍵成分，硼酸通過與RNA 核糖中的羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合復(fù)合物，使同樣長度的RNA 具有不同的泳動速度，電泳條帶彌散，同時(shí)有大的RNA 絡(luò)合復(fù)合物遲留在加樣孔中(一般會誤以為是基因組DNA污染)。RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合物的形成的多少和比例又與硼酸與RNA的數(shù)量比例有關(guān)，而RNA樣品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也會參與此反應(yīng)，使硼酸對RNA電泳的影響更復(fù)雜，所以TBE 對RNA電泳的影響沒有規(guī)律性和重復(fù)性。有的樣品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
 由于細(xì)菌細(xì)胞中70-80%的RNA為rRNA，后者又由23S(約3700nt)，16S(約1700nt)和5S(約100nt)三種組成，所以變性膠電泳后應(yīng)該在UV下看見三條清晰的rRNA帶。由于核酸長度與結(jié)合 EB的數(shù)量成正比(當(dāng)然還與RNA的二級結(jié)構(gòu)有關(guān)，雙鏈部分結(jié)合能力比單鏈部分強(qiáng))，所以23S rRNA條帶的熒光強(qiáng)度一般比16S rRNA條帶的熒光強(qiáng)度強(qiáng)2倍。如果這兩條rRNA 帶不清晰或比例小于此范圍則表示 RNA 有降解(因?yàn)榇蟮腞NA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：
 將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出 RNA的產(chǎn)量和產(chǎn)率。注意不要將RNA 稀釋在 DEPC 水中檢測 OD260和OD280，否則光吸收比在 TE中測得的低 10%-15%，因?yàn)楹怂峁馕崭芤?pH相關(guān)，而 DEPC 水中的DEPC高壓分解后產(chǎn)生的CO2與水反應(yīng)生成碳酸，使溶液 pH降低進(jìn)而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 純度測定：
 無污染的總 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之間，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)或多糖的污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。蛋白質(zhì)污染可以通過酚/lǜ仿抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分別用百奧萊博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過堿基互補(bǔ)或通過硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加 RNase處理后，這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非變性膠上電泳時(shí)也有較好分辨率。使用非變性膠時(shí)，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因?yàn)門BE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復(fù)合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用 PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用說明書進(jìn)行操作。

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