SY0103 SRE-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)
SRE-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)是高品質(zhì)的報(bào)告基因檢測(cè)產(chǎn)品,由北京百奧萊博供應(yīng),本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域,SRE-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)是我司眾多優(yōu)質(zhì)報(bào)告基因檢測(cè)之一,質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品,價(jià)格非常優(yōu)惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購(gòu)。...
特別提示:包括SRE-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:SRE-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒
英文名稱:SRE luciferase reporter plasmid
產(chǎn)品貨號(hào):SY0103
產(chǎn)品規(guī)格:1μg
SRE熒光素酶報(bào)告基因(報(bào)告基因質(zhì)粒)(SER luciferase reporter plasimd)是用于檢測(cè)SRF調(diào)節(jié)的信號(hào)通路活性的的報(bào)告基因。三重復(fù)合體TCR/Elk1/SRF結(jié)合到SRE進(jìn)行基因表達(dá)的調(diào)控。
SRE報(bào)告基因主要用于檢測(cè)細(xì)胞中SRF調(diào)節(jié)的信號(hào)通路的活性、藥物研究以及基因過表達(dá)和RNAi的表型分析等。
pGMSRE-Lu是我公司改造后的哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體,在其多克隆位點(diǎn)插入了多個(gè)SRE結(jié)合位點(diǎn),可以高靈敏度地檢測(cè)SRE的激活水平。同時(shí),對(duì)載體中預(yù)測(cè)出的其它轉(zhuǎn)錄因子以外的結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行了適當(dāng)?shù)耐蛔儯黾恿速|(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合特異性。由于質(zhì)粒體積減小,使得SRE報(bào)告基因更易于轉(zhuǎn)染。
質(zhì)粒圖譜
注意事項(xiàng)
本質(zhì)粒未經(jīng)我公司允許不得用于任何商業(yè)用途,也不得移交給訂貨人實(shí)驗(yàn)室以外的任何人或單位。
為了您的健康,實(shí)驗(yàn)操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服和帶一次性手套。
使用說明
pGMSRE -Lu可以采用常規(guī)轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞。用熒光素酶檢測(cè)試劑盒或雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。
儲(chǔ)存條件:-20℃。
根據(jù)您的關(guān)注的SRE-Luc熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒,您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求:
名稱:雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒
貨號(hào):YT273
規(guī)格:100次|1000次
本試劑盒是先以螢光素為底物來檢測(cè)螢火蟲螢光素酶,后以腸腔素為底物來檢測(cè)海腎螢光素酶,并且在后續(xù)加入海腎螢光素酶底物時(shí),同時(shí)加入抑制螢火蟲熒光素酶催化luciferin發(fā)光的物質(zhì),使后續(xù)檢測(cè)僅僅檢測(cè)到海腎螢光素酶的活性,實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)。
試劑盒組分:
報(bào)告基因細(xì)胞裂解液 | 60ml |
螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑 | 10ml |
海腎螢光素酶檢測(cè)緩沖液 | 10ml |
海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×) | 100μl |
螢火蟲螢光素酶是一種分子量約為61kD的蛋白,在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的過程中,會(huì)發(fā)出生物螢光。海腎螢光素酶是一種分子量約為36kD的蛋白,在氧氣存在的條件下,可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide,在coelenterazine氧化的過程中也會(huì)發(fā)出生物螢光。生物螢光可以通過化學(xué)發(fā)光儀或液閃測(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒的檢測(cè)原理參考下圖。
雙螢光素酶的檢測(cè)原理圖。
通過螢光素酶和其底物這一生物發(fā)光體系,可以非常靈敏、地檢測(cè)基因的表達(dá)。通常把感興趣
基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件或5’啟動(dòng)子區(qū)克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR區(qū)克隆在luciferase的下游等,構(gòu)建成報(bào)告基因(reporter gene)質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染細(xì)胞,用適當(dāng)藥物等處理細(xì)胞后裂解細(xì)胞,測(cè)定螢光素酶活性。通過螢光素酶活性的高低來判斷藥物處理等對(duì)目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用。Renilla luciferase相對(duì)更多地被用作轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)參,以消除細(xì)胞數(shù)量和轉(zhuǎn)染效率的差異。螢火蟲螢光素酶催化luciferin發(fā)光的zuì強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為560nm。海腎螢光素酶催化coelenterazine發(fā)光的zuì強(qiáng)發(fā)光波長(zhǎng)為465nm。
注意事項(xiàng):
1. 加入海腎螢光素酶檢測(cè)工作液后對(duì)于上一步驟中的螢火蟲螢光素酶的抑制可以達(dá)到99%以上。但總會(huì)殘留微量活性,因此,宜在轉(zhuǎn)染時(shí)把海腎螢光素酶的表達(dá)量控制在其RLU讀數(shù)高于螢火蟲螢光素酶RLU讀數(shù)的10%。海腎螢光素酶的讀數(shù)高于螢火蟲螢光素酶的讀數(shù)是完全可以的,通常不會(huì)有明顯的負(fù)面影響。
2. 為取得zuì佳測(cè)定效果,在用單管的化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定時(shí),樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同的時(shí)間內(nèi),例如30秒內(nèi);使用具有化學(xué)發(fā)光測(cè)定功能的多功能熒光酶標(biāo)儀時(shí),宜先把樣品全部加好,然后統(tǒng)一加入螢火蟲螢光素酶檢測(cè)試劑。
3. 由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響,所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。
4. 為保證螢光素酶檢測(cè)試劑的穩(wěn)定性,可以采取適當(dāng)分裝后避光保存的方法,以避免反復(fù)凍融和長(zhǎng)時(shí)
間暴露于室溫。經(jīng)測(cè)試,反復(fù)凍融三次,對(duì)測(cè)定結(jié)果無明顯影響。
5. 樣品和測(cè)定試劑混合后,必須等待1-2秒,再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定時(shí)間通常為10秒,根據(jù)情況也可以測(cè)定更長(zhǎng)或更短時(shí)間,但是同一批樣品宜使用相同的測(cè)定時(shí)間。
6. 海腎螢光素酶檢測(cè)底物(100×) 配制在無水乙醇中。由于無水乙醇容易揮發(fā),有時(shí)會(huì)在初次使用時(shí)發(fā)現(xiàn)體積明顯小于100μl的情況,此時(shí)用無水乙醇把體積補(bǔ)足至100μl,并混勻后即可使用。
7. 海腎螢光素酶檢測(cè)工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用,-20℃可以保存一周。隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)檢測(cè)效果會(huì)不斷下降,因此不可配制成工作液后長(zhǎng)期保存。
儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期一年。
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