MT0002 全血microRNA提取試劑盒

全血microRNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研試驗(yàn)，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價(jià)位合理，需要全血microRNA提取試劑盒等RNA提取純化產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...

特別提示：包括全血microRNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：全血microRNA提取試劑盒
英文名稱：microRNA Extraction Kit From Blood
產(chǎn)品貨號：MT0002
產(chǎn)品規(guī)格：25T|100T

我公司的全血microRNA(miRNA)提取試劑盒提取小RNA(＜200nt)具有操作步驟簡單、重復(fù)性zuì好、產(chǎn)率較高的特點(diǎn)。核酸提取的成功與否、提取質(zhì)量的好壞對后續(xù)實(shí)驗(yàn)起著至關(guān)重要的作用。使用TRIzol試劑提取總RNA，對總RNA中包含的部分小RNA進(jìn)行研究，該方法的缺點(diǎn)是總RNA中microRNA的比例較小，同時(shí)由于mRNA的干擾，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)反轉(zhuǎn)錄和RealTime PCR實(shí)驗(yàn)效率很低，很難獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，且結(jié)果不可靠。Biorab在探索miRNA分子功能的過程中開發(fā)的全血miRNA提取試劑盒，通過一步上柱即可獲得純度高達(dá)98%的不含大RNA的miRNA，而且可在45分鐘內(nèi)完成小RNA的提取。該miRNA提取試劑盒廣泛適用于凍存和新鮮的抗凝全血樣本（不適用于血清和血漿），每150μl全血可獲得~1μg的microRNA。

產(chǎn)品組成：

組分	MT0002A	MT0002B
miRNA Reagent A	7.5ml	30ml
miRNA Reagent B	10ml	40ml
miRNA 吸附柱	25套	100套
Rnase-Free TE Buffer	5ml	5ml

儲(chǔ)存：室溫可保存2年。
自備試劑：異丙醇、乙醇、75%異丙醇
注意：miRNA Reagent A溶液中含有胍鹽，其具有強(qiáng)烈的腐蝕性，試驗(yàn)時(shí)請務(wù)必佩戴防護(hù)眼鏡、手套、口罩等防護(hù)措施，如有皮膚接觸請立即用大量清水沖洗，再另行就醫(yī)。

操作方法：
1．向1.5ml EP管中加入300μl miRNA Reagent A。將150μl 抗凝全血加入到上述300μl miRNA Reagent A中，立即手腕用力震蕩混合均勻。室溫靜置 5分鐘 以充分裂解細(xì)胞。
2．向上述裂解完畢的裂解液中加入250μl miRNA Reagent B，上下顛倒混合均勻。13000rpm離心5分鐘，吸取550μl上清液，轉(zhuǎn)移到新的1.5ml EP管中。
3．向上述溶液中加入200μl無水乙醇，手腕用力震蕩數(shù)次，室溫放置 5分鐘。
4．13000rpm離心10分鐘，轉(zhuǎn)移700μl上清液到新的1.5mlEP管中。
5．向上述溶液中加入300μl 異丙醇，手腕用力上下顛倒數(shù)次。
6．分兩次將上述溶液倒入到 miRNA 吸附柱中，13000rpm離心1分鐘，倒掉過濾液。
7．向吸附柱中加入700μl 75%異丙醇洗滌一次，13000rpm離心1分鐘，倒掉過濾液。
8．向吸附柱中加入500μl無水乙醇洗滌一次，13000rpm離心1分鐘，倒掉過濾液。
9．吸附柱 13000rpm 空離心2分鐘，去掉殘留的乙醇。
10．將吸附柱放入到新 1.5ml EP管中，室溫放置 2分鐘，使殘留乙醇揮發(fā)。在吸附柱濾芯上加入30μl RnaseFree TE Buffer，室溫靜置 2分鐘，13000rpm離心2分鐘，洗脫產(chǎn)物即為提取的miRNA。（通常取3～5μl該產(chǎn)物，即可使用我司TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，貨號：MT0006）。


圖例：應(yīng)用全血miRNA提取試劑盒（MT0002）提取全血的microRNA。
 泳道1-3：-80℃凍存一年的全血；
 泳道4-6：新鮮抗凝全血。


常見問題：
1．本方法提取的小 RNA，95％以上為小 RNA（<200nt），有時(shí)會(huì)殘留一些>200nt的RNA，通常殘留的>200nt RNA不影響后續(xù)試驗(yàn)操作。
2．本試劑盒提取的小 RNA 由于不含 mRNA 等大分子量的RNA，因此更適合做后續(xù)反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)，從而進(jìn)行定量試驗(yàn)。
3．使用本試劑盒提取的microRNA 濃度通常在50ng/μl 左右，取5～10μl即可用于電泳檢測。取3~5μl即可用于我司TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（貨號：MT0006），通常使用我司優(yōu)化的miRNA-TaqMan RealTime PCR技術(shù)（貨號：MTTxxxxx）。

根據(jù)您的關(guān)注的全血microRNA提取試劑盒，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：



名稱：軟體動(dòng)物RNA柱式提取試劑盒
貨號：BTN101113
規(guī)格：50次
本試劑盒專門從各種軟體動(dòng)物組織樣品中快速提取總RNA的試劑盒，它能有效克服傳統(tǒng)TRIzol方法提取軟體組織RNA時(shí)，十分容易產(chǎn)生糖蛋白和酸性多糖污染這一缺點(diǎn)。

試劑盒特點(diǎn)：
1.適用于用常規(guī)方法難以提取的、各種富含多糖的軟體動(dòng)物，包括螺類、貝類、烏賊、章魚和蝸牛等。
2. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染，OD260/280一般均在1.9以上。
3. RNA產(chǎn)率一般為5-15μg/100mg。
4. 操作簡單，整個(gè)提取過程一般只需要10 多分鐘。
5. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern雜交、mRNA 純化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1. 先將50-200mg 新鮮或冷凍的軟體組織液氮研磨成粉，加入1mL溶液A溶解(溶液A使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并搖晃混勻)，然后將研磨物轉(zhuǎn)移到新的1.5mL離心管中，振蕩混合30秒。也可以將軟體組織剪碎后與溶液A一起用Polytron 勻漿機(jī)(內(nèi)切式勻漿機(jī))勻漿5-20秒，再轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管中。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。
2.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯fǎng，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。
3.室溫12000～15000g離心3～5分鐘，兩相間將有約5-10 毫米厚的細(xì)胞破碎物。
4. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μL上清液不取。
5. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
6. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
7. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000～15000g室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
10.室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
11. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到自備的RNase-free離心管中，加入50-100μL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
12. 12000～15000g室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
14. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。注意：測定OD時(shí)不要稀釋過度，否則濃度會(huì)在儀器能測的范圍之外。本方法提取的RNA 測OD時(shí)一般zuì多只能稀釋10-20倍。
15. RNA 純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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