BTN131231 Oligo(dT)纖維素

北京百奧萊博供應(yīng)的Oligo(dT)纖維素用于生化實驗研究等領(lǐng)域，Oligo(dT)纖維素是我司眾多優(yōu)質(zhì)RNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進口產(chǎn)品，價格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括Oligo(dT)纖維素在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Oligo(dT)纖維素
英文名稱：Oligo(dT) Cellulose
產(chǎn)品貨號：BTN131231
產(chǎn)品規(guī)格：25mg

本產(chǎn)品是共價交聯(lián)的Oligo(dT)纖維素親和基質(zhì)，可用于分離純化帶有poly(A)結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA，本產(chǎn)品結(jié)合能力大于400 A260 U/g。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存、有效期兩年。

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名稱：柱式分枝桿菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN130845
規(guī)格：50次

名稱：柱式細菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN80103
規(guī)格：50次
本試劑盒是細菌RNA提取試劑盒(BTN51102)的柱式升級產(chǎn)品，用于快速從各種常見的革氏陰性細菌中提取總RNA。如需提取革氏陽性細菌的RNA，可以選擇柱式真菌RNA提取試劑盒。跟細菌RNA提取試劑盒相比 它具有下列特點:
1. 操作更加簡單快速，省去了zuì費時的離心步驟。
2. 所得 RNA 純度更高，OD260/OD280一般在 2.0左右.
3.一般不含基因 DNA污染。
4.適用于各種革氏陰性細菌。
5. 高于進口同類產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	30ml
溶液B	20ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步驟是針對在 1.5mL塑料離心管中進行的微量提取的。

1. 新鮮配制裂解液。將溶液A和溶液B 按 1:1的比例混合。注意：溶液A和溶液B 混合后必須立即使用，不要放置，否則會產(chǎn)生沉淀。一次處理1.5mL左右的細菌需要0.6mL新鮮配制的裂解液(即0.3mL溶液A和0.3mL溶液B的混合液)。
2.在 1.5mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5mL 新鮮細菌。注意:由于細菌RNA 半衰期十分短，所以，必須使用zuì新鮮的、處于對數(shù)生長期的細菌。
3. 吸盡液體培養(yǎng)基，加入0.6mL 新配制的裂解液，用槍充分吹打細菌沉淀，確保細菌全部裂解，沒有塊狀物。
4. 將裂解物轉(zhuǎn)移至一個干凈的1.5mL塑料離心管中，然后加入0.2倍體積的自備氯fǎng(1mL 裂解物需 0.2mL 氯fǎng)，振蕩器上充分振蕩混均 30秒。
5. 12000～15000g室溫離心 3～5分鐘。
6. 將上清液(約0.6-0.8mL)轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。注意：離心后下層有 機相和中間層含有 DNA和蛋白質(zhì)，避免觸及，否則將產(chǎn)生蛋白質(zhì)和DNA污染。為保險起見，可以留下 100μL上清液不取。同時吸取上清時zuì好緩慢進行，否則容易吸出交界面的不可見的絲狀 DNA。
7. 12000～15000g室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。
8. 加 0.7mL 通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫離心半分鐘，棄收集管中的穿透液。一次洗滌一般足夠去除雜質(zhì)。但如果樣品 OD260/280 比值不高，可以再用0.3mL通用洗柱液重復(fù)此步一次。
9.室溫 12000～15000g離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會影響 RNA的使用。
10. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一自備的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脫液。
11.室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
12. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern雜交，強烈建議用戶使 用甲醛變性膠進行 RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
13. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之 間)檢測其在 OD260的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出 RNA的產(chǎn)量(濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
14. RNA 純度測定：無污染的總 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之 間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分 別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是DNA污染嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過堿基 互補或通過硼酸絡(luò)合(如果使用 TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加 RNase處理后，這些紅色熒光物(RNA)一般會消失。為避免此現(xiàn)象，建議 zuì好使用甲醛變性膠電泳和RNA 專用上樣液(如我們的RNAload)。
Q：如何確認和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如 果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進一步確認可以使用 PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用百奧萊博的非酶的DNA 去除劑 DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一 般都有殘留 RNase污染，所以必須嚴格按照廠家提供的使用手冊進行操作。

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