BTN51102 細(xì)菌RNA提取試劑盒

細(xì)菌RNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，我公司專注于RNA提取純化產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的細(xì)菌RNA提取試劑盒質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括細(xì)菌RNA提取試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：細(xì)菌RNA提取試劑盒
英文名稱：Bacterial RNA extraction kit
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN51102
產(chǎn)品規(guī)格：100次

本試劑盒是在動(dòng)物RNA提取試劑盒基礎(chǔ)上根據(jù)細(xì)菌提取的具體情況改良而得。它基于異硫氰酸胍/酚/氯f(wàn)ǎng提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各種常見(jiàn)的革氏陰性細(xì)菌。如果需要提革氏陽(yáng)性細(xì)菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以選擇真菌RNA提取試劑盒。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作簡(jiǎn)單快速，只要十分鐘左右,可以全在室溫下進(jìn)行。
2. 所得 RNA 質(zhì)量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 靈敏度高，可以從一個(gè)菌落中提取到普通電泳能夠檢測(cè)到的總 RNA。
4. 高于進(jìn)口同類(lèi)產(chǎn)品。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
細(xì)菌RNA提取試劑	100ml
說(shuō)明書(shū)	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5mL 新鮮細(xì)菌(注意:由于細(xì)菌RNA 半衰期十分短，所以，必須使用zuì新鮮細(xì)菌)，吸盡液體培養(yǎng)基，加入1mL細(xì)菌RNA提取試劑盒并用槍充分吹打，確保細(xì)菌全部裂解，沒(méi)有塊狀物。
 如果使用菌落，則用接種環(huán)小心將其轉(zhuǎn)移到裝有1mL細(xì)菌RNA提取試劑盒的1.5 m塑料離心管中，用移液槍吹打均勻。在細(xì)菌數(shù)較少時(shí)，建議使 用助沉劑 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL 氯f(wàn)ǎng，在振蕩器上充分振蕩混均 30秒(必須將管底的液體振蕩起來(lái)，否則不能有效將DNA 打斷和去除蛋白質(zhì))。
3. 12000～15000g室溫離心3分鐘。上清液無(wú)色，下層液呈籃色，中間為蛋白質(zhì)。小心將上清液轉(zhuǎn)移到另一干凈 1.5ml塑料離心管中，上清液體積約為0.6mL。為避免觸及中間層的DNA和蛋白質(zhì)，建議分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。當(dāng)細(xì)菌數(shù)量較少時(shí)，中間層十分松散，上清時(shí)很容易吸到下層有機(jī)相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
5. 12000～15000室溫離心 3-10分鐘，RNA 將在管底側(cè)面形成沉淀。
6.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
7.在離心管中加入1mL 75%乙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
8. 12000～15000g室溫離心 1分鐘。
9.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
10. 重復(fù)第 8 到第 10 步一次。
11. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留液(約50μl)。
12. 短暫放 1-2分鐘后加入適量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃長(zhǎng)期保存。
13. RNA 完整性的電泳檢測(cè)：
 如果需要做 Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是簡(jiǎn)單檢測(cè)，可以使用TAE或百奧萊博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 兩用快速電泳液，但文獻(xiàn)報(bào)道必須使用變性上樣液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上樣液不含變性劑，也沒(méi)經(jīng)過(guò)去 RNase處理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)門(mén)BE 所含硼酸是研究多糖的經(jīng)典方法----硼酸絡(luò)合法中的關(guān)鍵成分，硼酸通過(guò)與RNA 核糖中的羥基發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)，形成RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合復(fù)合物，使同樣長(zhǎng)度的RNA 具有不同的泳動(dòng)速度，電泳條帶彌散，同時(shí)有大的RNA 絡(luò)合復(fù)合物遲留在加樣孔中(一般會(huì)誤以為是基因組DNA污染)。RNA分子內(nèi)或RNA分子間的絡(luò)合物的形成的多少和比例又與硼酸與RNA的數(shù)量比例有關(guān)，而RNA樣品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也會(huì)參與此反應(yīng)，使硼酸對(duì)RNA電泳的影響更復(fù)雜，所以TBE 對(duì)RNA電泳的影響沒(méi)有規(guī)律性和重復(fù)性。有的樣品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
 由于細(xì)菌細(xì)胞中70-80%的RNA為rRNA，后者又由23S(約3700nt)，16S(約1700nt)和5S(約100nt)三種組成，所以變性膠電泳后應(yīng)該在UV下看見(jiàn)三條清晰的rRNA帶。由于核酸長(zhǎng)度與結(jié)合 EB的數(shù)量成正比(當(dāng)然還與RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)有關(guān)，雙鏈部分結(jié)合能力比單鏈部分強(qiáng))，所以23S rRNA條帶的熒光強(qiáng)度一般比16S rRNA條帶的熒光強(qiáng)度強(qiáng)2倍。如果這兩條rRNA 帶不清晰或比例小于此范圍則表示 RNA 有降解(因?yàn)榇蟮腞NA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：
 將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出 RNA的產(chǎn)量和產(chǎn)率。注意不要將RNA 稀釋在 DEPC 水中檢測(cè) OD260和OD280，否則光吸收比在 TE中測(cè)得的低 10%-15%，因?yàn)楹怂峁馕崭芤?pH相關(guān)，而 DEPC 水中的DEPC高壓分解后產(chǎn)生的CO2與水反應(yīng)生成碳酸，使溶液 pH降低進(jìn)而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 純度測(cè)定：
 無(wú)污染的總 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之間，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)或多糖的污染，但一般不影響 RT-PCR等反應(yīng)。蛋白質(zhì)污染可以通過(guò)酚/氯f(wàn)ǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分別用百奧萊博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，百奧萊博初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過(guò)堿基互補(bǔ)或通過(guò)硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加 RNase處理后，這些紅色熒光物一般會(huì)消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非變性膠上電泳時(shí)也有較好分辨率。使用非變性膠時(shí)，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因?yàn)門(mén)BE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復(fù)合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用 PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

根據(jù)您的關(guān)注的細(xì)菌RNA提取試劑盒，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：病毒沉淀劑
貨號(hào)：BTN110810
規(guī)格：100mL
生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常常需要從液體樣品(如血漿，培養(yǎng)基)中純化病毒，但由于病毒顆粒十分細(xì)小，傳統(tǒng)的分離方法是使用長(zhǎng)時(shí)間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來(lái)，此操作非常繁瑣，并且病毒在此過(guò)程中容易變性。為了克服傳統(tǒng)方法的缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 能濃縮病毒100倍以上，適合各種病毒。
2. 比超速離心法、密度梯度離心分離法和過(guò)濾法更溫和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，適合各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)，包括轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)和核酸純化。
3. 比超速離心法和密度梯度離心分離法簡(jiǎn)單，不需要大型離心機(jī)等設(shè)備。
4.適合水樣、細(xì)胞培養(yǎng)基上清和其他不含細(xì)胞的樣品。本產(chǎn)品100mL可以處理400mL含病毒的溶液，可以將病毒濃縮100倍以上。
5. 已經(jīng)成功用于coronaviruses 、rhabdoviruses 、parainfluenzaviruses 、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
6. 對(duì)環(huán)境水樣，請(qǐng)不要使用本產(chǎn)品，而是使用水體病毒沉淀劑。

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑：PBS緩沖液或TES緩沖液(用于重懸病毒)

使用方法：
注意：需要盡量減少含病毒溶液中蛋白的濃度。收集培養(yǎng)細(xì)胞分泌的病毒前，zuì好換上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培養(yǎng)基。
1. 將培養(yǎng)細(xì)胞刮下，和培養(yǎng)基一起全部轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)還有病毒顆粒，并且病毒顆?？梢缘挚箖鋈?，則可以把細(xì)胞凍融數(shù)次，釋放出包漿的病毒，然后再轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中，10000rpm 4℃離心20分鐘。轉(zhuǎn)移上清(含病毒)到新離心管中。如果病毒溶液不含細(xì)胞成分，則直接進(jìn)入下一步。
2.在含病毒的上清中加入1/4 總體積的本產(chǎn)品(4mL 病毒溶液則加1mL 本產(chǎn)品)，4℃冰箱中放置過(guò)夜或12小時(shí)以上。病毒在此期間將形成沉淀。
3. 10000rpm 4℃離心20分鐘收集病毒沉淀，盡可能棄掉所有上清(可以暫時(shí)保留上清，等確認(rèn)病毒濃縮成功后再丟棄)。
4. 將離心管放回離心機(jī)短暫離心數(shù)秒，再次小心去除殘留上清。
5. 將沉淀(病毒顆粒)溶于適量預(yù)冷的自備的緩沖液(如PBS緩沖液、TES緩沖液和培養(yǎng)基中，取決于后續(xù)實(shí)驗(yàn))，立即使用或者-20℃長(zhǎng)期保存。

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貨號(hào)	名稱	規(guī)格
BTN110810	病毒沉淀劑	100mL
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BTN71203	植物RNA柱式提取試劑盒	50次
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BTN60201	非酶DNA清除劑(＞200nt)	1.5mL

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