BTN3070 動物RNA提取試劑

北京百奧萊博供應的動物RNA提取試劑僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多動物RNA提取試劑等RNA提取純化產品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括動物RNA提取試劑(TRIzol)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產品名稱：動物RNA提取試劑(TRIzol)
英文名稱：Animal RNA Extraction Reagent TRIzol
產品貨號：BTN3070
產品規(guī)格：100mL

本試劑盒是類似于TRIzol、基于異硫氰酸胍/酚/lǜ仿提取原理的快速總RNA提取試劑，可用于從各種動物組織(包括白細胞)和部分植物材料中快速提取總RNA。

產品特點：
1. 操作簡單快速，只要10分鐘左右，可以全在室溫下進行。
2. RNA 質量高，OD260/OD280一般在1.9左右。一般不含用RT-PCR可以檢測到的基因組DNA污染。
3.適用于大部分實驗材料，如培養(yǎng)細胞、各種動物材料和少數(shù)植物材料。植物RNA的提取zuì好使用植物RNA提取試劑盒。
4. 高于進口TRIzol和TRI Reagent等同類產品。

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
注意：下面的操作步驟是用1mL 本產品進行的微量提取的，細胞使用量一定要準確，不能超過下述用量，否則將超出本產品的裂解能力，RNA產量將急劇降低。如果樣品量大，請按比例增加各成份的用量。RNA 工作環(huán)境zuì好用的固相RNase清除劑(BTN3080)徹底處理。
1. 對貼壁細胞(10 平方厘米)：吸盡培養(yǎng)液，加入1mL的本產品用槍充分吹打確保細胞全部裂解，然后將裂解液轉移至干凈的1.5mL塑料離心管中，進入第6 步。
2. 對懸浮細胞(五百萬至一千萬個)：離心收集細胞，吸盡液體，加入1mL本產品，用槍充分吹打確保細胞全部裂解，然后將裂解液轉移到干凈的1.5mL塑料離心管中，進入第6 步。
3. 對新鮮組織(50-100mg)：將新鮮組織剪切成小塊，放入10mL或15mL塑料離心管中，加入1mL的本產品，用Polytron 剪切式勻漿器冰上勻漿30秒左右，將勻漿液轉移至新的1.5mL塑料離心管中，進入第6步。注意：對肝、脾、胰、腎等細胞分裂十分旺盛的組織(細胞中含大量正在復制的DNA)，使用量不要超過30-50mg，否則十分容易產生DNA污染。對10mg以下的組織，zuì好加入本公司的微量RNA 助沉劑。
4. 對RNAhold 保存的組織(50-100mg)：先用紙吸去RNAhold液體后再剪切成小塊，其余操作同第3 步。RNAhold處理后的組織韌性很強，勻漿時間需要適當延長。
5. 對液氮中保存的組織(50-100mg)：在研缽中研磨成粉，加入1mL 本產品，用槍充分吹打確保細胞全部裂解，然后將裂解液轉移到干凈的1.5mL塑料離心管中，進入第6 步。
6.在裝有裂解物/勻漿物的1.5mL塑料離心管中加入0.2mL自備lǜ仿，振蕩器上充分振蕩混均30秒。注意：一定要把官底的溶液震蕩起來，否則只是液面的振動。
7. 13000-15000g室溫離心3分鐘。
8. 將上清液(約0.6mL)轉移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中。下層有機相(藍色)和中間層含有DNA和蛋白質，避免觸及，否則將產生蛋白質和DNA污染。為保險起見，可以留下50-100μl上清液不取。
9. 對脂類豐富的組織(如脂肪組織和腦組織)，需再重復lǜ仿抽提一到兩次以讓lǜ仿充分去除脂類分子。
10.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩30秒混勻。
11. 13000-15000g室溫離心5分鐘，離心底的側面將形成RNA沉淀。如果組織使用量低于10mg或需要提高RNA 回收率，可以將離心時間延長到20或30分鐘。
12.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
13.在含RNA沉淀的離心管中加入1mL 75%乙醇，振蕩混勻30秒。
14. 13000-15000g室溫離心1分鐘。
15.小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
16. 重復第13-15的洗滌步驟一次(也可以省略)。
17. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留乙醇(約50μL)。注意不要吸棄RNA
沉淀。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的后續(xù)使用。
18.室溫放1-2分鐘后立即加入50-100μl RNase-free 水使RNA沉淀溶解。
千萬不要用真空離心法使RNA沉淀過于干燥，否則RNA 將變得十分難溶。RNA樣品可以立即使用或存放于-80℃待用。
注意：由于RNase-free 水沒有主動滅活殘留RNase的功能，而任何方法提取的RNA 都可能有殘留的RNase，所以強烈建議客戶使用本公司推出的具有主動滅活殘留RNase 功能的、同時跟后續(xù)RT-PCR等反應兼容的液相RNase 清除劑(BTN3091)。

附一：RNA 完整性的電泳檢測(僅供參考，本產品不含相關試劑)
如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是簡單檢測，可以使用TAE緩沖液或超快核酸電泳液進行常規(guī)電泳，但文獻報道必須使用RNAload這樣的變性上樣液(BioTechniques，9：558，1990)。普通DNA上樣液不含變性劑，也沒經過去RNase處理，所以zuì好不要使用，否則RNA容易降解。
動物RNA電泳后應該在UV下呈現(xiàn)三條清晰的rRNA 帶，28S rRNA條帶的熒光強度一般比18S rRNA 條帶的熒光強度強1.5-2.3倍。如果這兩條rRNA 帶不清晰或比例小于此范圍則表示RNA 有降解(因為大的RNA 被酶降解的可能更大)。
跟動物一樣，植物果實和種子的RNA一般有三條電泳帶，但植物葉片的RNA 有四條或更多rRNA帶，多余的RNA 來源于葉綠體。
如果電泳發(fā)現(xiàn)RNA樣品中有DNA污染(一般是使用過多樣品造成)，可分別用非酶DNA 清除劑或RNase-free DNase 清除。

附二：RNA產量和純度測定(僅供參考，本產品不含相關試劑)
用pH在7.5-8.2的TE緩沖液將5-10μL RNA稀釋10-20倍后在OD260和OD260測光吸收，通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出RNA的產量(濃度×體積)和產率(RNA產量/組織用量)。RNA的產率還隨組織的營養(yǎng)狀態(tài)和組織的種類不同而不同，一般來說，代謝旺盛的組織(如肝臟和腎臟)RNA的產率高，代謝不旺盛的組織(如肌肉和脂肪組織)RNA的產率低，下面是常見動物組織的RNA產率:
肌肉，胎盤和腦組織: 1-2μg RNA/mg 組織
肝，胰和腎組織: 5-10μg RNA/mg 組織
培養(yǎng)細胞: 5-15μg/10E6細胞
RNA的純度通過OD260/OD280 來確定，一般在1.8-2.1之間即算合格。但即使低于此范圍，一般也不會影響RT-PCR等反應。
蛋白質污染可以通過酚/lǜ仿抽提一次然后酒精沉淀去除，多糖污染可以用多糖清除劑去除。

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名稱：Oligo(dT)再生溶液
貨號：BTN130976
規(guī)格：250mL
本產品是針對Oligo(dT)纖維素再生的溶液，可有效去除親和基質中的殘留RNA和其他雜質，恢復Oligo(dT)纖維素基質的結合能力。

儲存條件：常溫運輸和保存、避光。有效期一年。

名稱：RNA長效保存液
貨號：BTN3100
規(guī)格：1.5mL
本品是一種能抑制RNase活性的小分子混合物,用于防止RNase對RNA的降解作用。

產品特點：
1.抑制 RNase，保存在 RNA保存液中的RNA可以在抵抗100 ng/mL的RNase A的降解作用達 36小時，效果比人胎盤RNase抑制蛋白和RVC更有效。
2. 耐高溫,100℃保溫30分鐘后活性不受任何影響。
3. 抗氧化，不需要DTT。
4. 有效pH范圍廣。
5.產品為淡紅色液體，可以-20℃保存兩年。

產品組成：

成分	規(guī)格
RNA保存液	1.5ml
LiCl溶液(10M)	1.5ml
說明書	1份

儲存條件：4℃運輸，-20℃保存,有效期一年。

使用方法：
將本產品直接用于溶解 RNA沉淀(跟使用 RNase-free 水一樣)，然后 放置在適當溫度下保存(一般在-20℃)。保存在 RNApreserve中的RNA可以直接電泳，不影響Northern雜交。但由于RNA保存液會抑制后續(xù)酶反應，所以如果RNA要用于RT-PCR等反應，需要預先用 LiCl沉淀去除RNA保存液(將1/3倍體積的LiCl加入溶液中，4℃12000～15000g離心20-30分鐘，棄上清，用75%乙醇洗一次既得RNA沉淀)。

疑難解答：
Q：本產品抑制 RNase的Ki值是多少？
A：本產品是混合物，不能確定其Ki值。
Q：百奧萊博的液相RNase清除劑和RNA保存液都可以保存 RNA，都能滅活/抑制溶液中 2 ng/μL左右的RNase，它們的主要區(qū)別何在？
A：一是原理不同。前者通過共價修飾使 RNase 失活(類似于DEPC)；后者通過競爭抑制保護 RNA(類似于RNase Inhibitor)。二是兼容性不同。前者與很多后續(xù)反應兼容，故 RNA可以直接使用；后者會抑制很多后續(xù)反應，需要去除后在使用 RNA。三是穩(wěn)定性不同。后者比前者更穩(wěn)定，更耐熱。

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