WE0191 TRIzon試劑(總RNA提取)

TRIzon試劑(總RNA提取)是高品質(zhì)的RNA提取純化產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，TRIzon試劑(總RNA提取)是我司眾多優(yōu)質(zhì)RNA提取純化之一，質(zhì)量堪比同類進(jìn)口產(chǎn)品，價(jià)格非常優(yōu)惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...

特別提示：包括TRIzon試劑(總RNA提取)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：TRIzon試劑(總RNA提取)
英文名稱：TRIzon Reagent
產(chǎn)品貨號(hào)：WE0191
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

  TRIzon是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便，顏色鮮明，便于分層。本試劑適用范圍廣泛，可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。樣品在TRIzon中被充分裂解的同時(shí)能夠zuì大限度地保證RNA的完整性。在加入氯fǎng離心后，溶液會(huì)分成三層：上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相，RNA分布在上清層中。收集上清層后，經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好，無蛋白和DNA污染，可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等。

自備試劑：氯fǎng、異丙醇、75%乙醇、無RNase的水(新開封或提取RNA專用)。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)：
1、預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1)使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5M的NaOH中浸泡10分鐘，用水徹底沖洗后高壓滅菌。
3)配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。
4)操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過程中要勤換手套。
2、提取的樣品避免反復(fù)凍融，否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
3、本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內(nèi)、接觸皮膚、吞食等會(huì)導(dǎo)致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)物品，如防護(hù)服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛，應(yīng)立即用大量的水沖洗并前往醫(yī)院治療。
4、樣品用TRIzon 勻漿后，如不即刻加入氯fǎng，置于-70℃下可放置一個(gè)月以上。
5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短，容易降解，建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成cDNA，Northern Blot等。
6、若下游實(shí)驗(yàn)對(duì)DNA非常敏感，建議用不含RNase的DNase I(貨號(hào)：WE0213A)對(duì)RNA進(jìn)行處理。

操作步驟：

1．各種材料的處理
1a.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在TRIzon中迅速研磨，每30-50 mg組織加入1ml TRIzon，混勻。
注意：樣品體積一般不要超過TRIzon體積的10%。
1b.動(dòng)物組織：取新鮮或-70℃凍存的動(dòng)物組織盡量剪碎，每30-50 mg組織加入1ml的TRIzon，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入TRIzon 1ml混勻。
注意：樣品體積一般不要超過TRIzon體積的10%。
1c.單層培養(yǎng)細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，可直接在培養(yǎng)板中加入適量TRIzon(每10cm2面積需要1ml TRIzon)，用取樣器反復(fù)吹打使細(xì)胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后，將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至RNase-Free的離心管中，300×g離心5 min，收集細(xì)胞沉淀，仔細(xì)吸除所有上清，加入TRIzon 1ml混勻。
注意：
1)收集細(xì)胞數(shù)量不要超過1×107。
2)TRNzol加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定，不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果TRIzon加量不足，可能導(dǎo)致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集細(xì)胞時(shí)一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會(huì)導(dǎo)致裂解不完全，造成RNA的產(chǎn)量降低。
1d.細(xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞。每5×106-1×107動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzon。
注意：
1)加入TRIzon前不要洗滌細(xì)胞，以免RNA降解。
2)一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要?jiǎng)驖{儀或液氮研磨處理。
1e.血液處理：直接取新鮮的血液，加入3倍體積TRIzon(推薦0.25ml全血加入0.75mlTRIzon)，充分振蕩混勻。
1f.可選步驟：對(duì)于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質(zhì)含量高的樣品，如肌肉組織、脂肪組織或植物的塊莖，可以在勻漿處理后4℃，12000rpm(~～13400×g)離心10分鐘以除去不溶物質(zhì)，此時(shí)沉淀中含胞外物質(zhì)、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

2、樣品中加入TRIzon后反復(fù)吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘，使蛋白核酸復(fù)合物完全分離。
3、向以上溶液中加入氯fǎng，每使用1ml TRIzon加入0.2ml氯fǎng，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，室溫放置2-3分鐘。
4、4℃下12000rpm離心15分鐘，此時(shí)樣品分成三層：紅色有機(jī)相，中間層和上層無色水相，RNA 主要在水相中，把水相(約600μl)轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的RNase-Free離心管(自備)中。
5、在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇，顛倒混勻，室溫放置10分鐘。
6、4℃ 12000rpm 離心10分鐘，棄上清。
7、加入75%乙醇(用無RNase的水配制)洗滌沉淀。每使用1ml TRIzon用1ml 75%乙醇對(duì)沉淀進(jìn)行洗滌。
8、4℃ 12000rpm離心3分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉淀。
注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。
9、室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-100μl無RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。
注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。

儲(chǔ)存條件：2～8℃避光。

根據(jù)您的關(guān)注的TRIzon試劑(總RNA提取)，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：



名稱：昆蟲RNA柱式提取試劑盒
貨號(hào)：BTN81220
規(guī)格：50次
本試劑盒是專門用于從富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的動(dòng)物樣品(尤其是昆蟲樣品)中提取總RNA的試劑。

試劑盒特點(diǎn)：
1. 操作簡單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。
2. RNA純度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。
3.適用于各種昆蟲組織，每100mg組織能提取到20-30μg 總RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。
5.一站式，提供RNase-free的樣品收集管。

試劑盒組成：

成分	規(guī)格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脫液	10ml
說明書	1份

儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸，4℃保存(RNA洗脫液zuì好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 將50-300mg昆蟲組織放入10-15mL塑料離心管中，加入1mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織，硯磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。
2. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。
3.在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯fǎng，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。
4.室溫12000 rmp離心3～5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液(約0.6mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中，下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
7. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，12000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室溫12000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室溫12000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
11.室溫12000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 12000 rmp室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆蟲的28S RNA被切割成兩個(gè)小的片段，彼此用氫鍵相連，所以在甲醛變性膠中，沒有28S帶出現(xiàn)(文獻(xiàn)見：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10μl RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量(濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。

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