1.刷型手性色譜柱的出現(xiàn)和發(fā)展源于Bill Prikle及其同事的工作。六十年代，Bill Prikle將手性核磁共振中的成果運(yùn)用到手性HPLC固定相研究中，通過(guò)不斷實(shí)踐，發(fā)明了應(yīng)用范圍較廣、柱效很好的手性色譜柱。

    2.刷型手性色譜柱是根據(jù)三點(diǎn)識(shí)別模式設(shè)計(jì)的，屬于Irving Wainer分類(lèi)中的種類(lèi)型。

    3.刷型手性固定相分為π電子接受型和π電子提供型兩類(lèi)。常見(jiàn)的π電子接受型固定相是由（R）-N-3，5-二硝基苯甲酰苯基甘氨酸鍵合到γ-氨丙基硅膠上的制成。此類(lèi)刷型手性色譜柱可以分離許多可提供π電子的芳香族化合物，或用氯化萘酚等對(duì)化合物進(jìn)行衍生化后進(jìn)行手性分離。π電子供給型固定相常見(jiàn)的是共價(jià)結(jié)合到硅膠上的萘基氨基酸衍生物，這種固定相要求被分析物具有π電子接受基團(tuán)，例如二硝基苯甲?；?。醇類(lèi)、羧酸類(lèi)、胺類(lèi)等，可以用氯化二硝基苯甲酰、異腈酸鹽、或二硝基苯胺等進(jìn)行衍生化后，用π電子供給型固定相達(dá)到手性分離。

    4.刷型固定相的在于其易于合成。合成方法在Bill Prikle的著作中有詳細(xì)的說(shuō)明。另外，刷型固定相具有高的容量因子，因此具有高的選擇因子。它的不利之處在于它僅對(duì)芳香族化合物有效，有時(shí)不得不進(jìn)行衍生化反應(yīng)。但值得一提的是，這種衍生化反應(yīng)是非手性衍生反應(yīng)，所以不存在手性衍生的問(wèn)題。刷型手性色譜使用的流動(dòng)相基本是性弱的有機(jī)溶劑，這對(duì)于制備色譜來(lái)講未必是缺點(diǎn)。

    近來(lái)，刷型固定相出現(xiàn)了π電子供給和接受基因的混合固定相。如：WHELK-O和BLAMO，及α-BURKE-Ⅱ固定相。α-BURKE-Ⅱ相十分適用于β-阻斷劑的手性分離。典型的流動(dòng)相為二氯甲烷-乙醇-甲醇混合物，比例為85：10：5。加入10mM醋酸銨可以調(diào)整保留時(shí)間。SS BLAMO Ⅱ，同時(shí)具有π電子供體區(qū)和受體區(qū)，形成手性裂縫，因此對(duì)于某些分子具有很高選擇性。

纖維素型：

    1.纖維素型手性色譜柱的分離作用包括相互吸引的作用及形成包埋復(fù)合物。它們屬于Wainer分類(lèi)中的第2種類(lèi)型。市售的手性色譜柱為微晶三醋酸基、三安息香酸基、三苯基氨基酸鹽纖維素固定相。很多化合物可通過(guò)此類(lèi)型的色譜柱得到分離。這種類(lèi)型的手性色譜柱種類(lèi)也很齊全。流動(dòng)相使用低性溶劑，典型的流動(dòng)相為乙醇-己烷混合物。但特別要注意由于氯可以使纖維素從硅膠上脫落，因此要確保流動(dòng)相中無(wú)含氯溶劑。

    2.這種類(lèi)型的手性色譜柱主要的制造商之一是日本的Daicel公司，他們生產(chǎn)的纖維素酯和氨基甲酸纖維素柱可以分離多種生物堿和藥物。特別值得一提的是OD柱。在某手性化合物異構(gòu)體的分離中，分離度超過(guò)了25，這意味著載樣量可以很高，對(duì)于制備十分有利。

    3.纖維素固定相的每個(gè)單元都為螺旋型，而且這種螺旋結(jié)構(gòu)還存在性作用、π-π作用及形成包埋復(fù)合物等手性分離因素。淀粉代替纖維素制成的此類(lèi)手性柱顯示了和纖維素柱不同的選擇性，但是穩(wěn)定性較差。因?yàn)榈矸凼撬苄缘?，因此流?dòng)相中必須無(wú)水才能保證柱子壽命。目前此類(lèi)型的柱子能分離80%左右可能面臨到的所有手性化合物。此類(lèi)柱子通常用于正相系統(tǒng)，用正己烷-乙醇，正己烷-異丙醇混合溶劑為流動(dòng)相。OD柱也可用于反相的情況，但流動(dòng)相必須含有高濃度的高氯酸鹽緩沖液，以防止固定相溶解。即使這樣，使用較長(zhǎng)時(shí)間以后色譜柱也難免要受到損害，但是在某些情況下使用反相系統(tǒng)分離效果要優(yōu)于使用正相系統(tǒng)。

環(huán)糊精型：

    1.環(huán)糊精是通過(guò)Bacillus Macerans 淀粉酶或環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶水解淀粉得到的環(huán)型低聚糖。通過(guò)控制環(huán)糊精轉(zhuǎn)移酶的水解反應(yīng)條件可得到不同尺寸的環(huán)糊精。市售的環(huán)糊精主要是α、β、γ三種類(lèi)型，分別含6、7、8個(gè)吡喃葡萄糖單元。環(huán)糊精分子成錐筒型，構(gòu)成一個(gè)洞穴，洞穴的孔徑由構(gòu)成環(huán)糊精的吡喃葡萄糖的數(shù)目決定。

    環(huán)糊精類(lèi)型及洞穴的孔徑等見(jiàn)下表：

環(huán)糊精     糖元數(shù)目    洞穴孔徑    可進(jìn)入洞穴的分子類(lèi)型    手性中心數(shù)目

  α         6         4.5-6.0    5-6元環(huán)的芳香族化合物        30

  β         7         6.0-8.0          聯(lián)苯或萘               35

  γ         8         8.0-10.0       取代芘和類(lèi)固醇           40

    2，3位仲羥基分布在環(huán)糊精洞口，6位伯羥基在環(huán)糊精分子的外部，這意味著洞穴內(nèi)部是相對(duì)疏水的區(qū)域。用環(huán)糊精手性固定相產(chǎn)生手性識(shí)別要求被拆分物的疏水部分能嵌入環(huán)糊精洞穴中，形成可逆的、穩(wěn)定性不同的包合物，環(huán)糊精洞口的羥基和被拆分物的性基團(tuán)相互作用。由于形成包合物速度較慢，因此可能導(dǎo)致色譜峰峰形較差，同樣也影響了其在制備色譜中的應(yīng)用。

    2.環(huán)糊精固定相的選擇性取決分析物的分子大??；α-環(huán)糊精只能允許單苯基或萘基進(jìn)入，β-環(huán)糊精允許萘基及多取代的苯基進(jìn)入，γ-環(huán)糊精僅用于大分子萜類(lèi)。β-環(huán)糊精手性固定相應(yīng)用范圍廣。Ibuprofen通過(guò)β-環(huán)糊精色譜柱得到分離，說(shuō)明了pH值對(duì)氫鍵的影響。當(dāng)流動(dòng)相的pH=7時(shí)，觀察不到拆分的跡象。pH=4時(shí)，可達(dá)到好的分離效果。通常分離氨基酸時(shí)，常采用低的pH值，以抑制酸性基團(tuán)的離子化，同時(shí)也增強(qiáng)氨基的質(zhì)子化。磷酸三乙胺鹽、乙酸三乙胺鹽證明對(duì)β-環(huán)糊精色譜柱來(lái)說(shuō)是很好的緩沖液。通常緩沖液是0.1%三乙胺溶液，用磷酸或醋酸調(diào)節(jié)到合適的pH值。 高的流速會(huì)降低形成復(fù)合物的能力，低流速分離效果較好，0.5-1ml/min的流速。另外，增加緩沖液的濃度可以克服流速的影響，因?yàn)樗梢栽黾迎h(huán)糊精洞穴和流動(dòng)相的吸引力。

    常用緩沖液及其使用濃度如下表所示：

    緩沖液                    濃度                  目的

TEAA（乙酸三乙胺鹽）         0.01-2% 

NH4NO3                       10-500mM          (用于減小包埋)

檸檬酸鹽                     10-200mM        (特別適合于酸性化合物)

醋酸銨                       10-200mM 

pH值選擇見(jiàn)下表:

醇和胺 pH4                                       (加強(qiáng)NH的離子化)

酸                               pH7

    優(yōu)化手性分離條件要考慮的方面有：pH值對(duì)分離度的影響；流速對(duì)分離度的影響；柱溫、有機(jī)相比例、緩沖鹽濃度對(duì)分離度的影響。

環(huán)糊精的修飾：

    1.近，對(duì)環(huán)糊精的修飾使環(huán)糊精型手性色譜柱可以分離更多的化合物，并可用于氣相手性色譜分離。衍生化是通過(guò)將不同的基因鍵合到環(huán)糊精洞穴表面的羥基上。衍生化反應(yīng)包括乙基化、S-羥基丙基化、生成S或R-萘基乙基氨基甲酸鹽、3，5二甲基苯基氨基甲酸鹽和環(huán)狀對(duì)甲苯酰酯。這些的環(huán)糊精固定相有許多優(yōu)點(diǎn)，它們可以分離更多化合物，價(jià)格上也有競(jìng)爭(zhēng)力，由于改進(jìn)了手性識(shí)別能力使其更適用于制備色譜。