相信大家在研究過程中總會(huì)遇到一些「奇葩」樣本，他們就像攔路虎一樣，總是在找我們的麻煩。DNA 提取得率低，RNA 提出總是降解，這些樣本躲又躲不開，繞又繞不過，提還提不出來簡直就是煩死個(gè)人！

 

其實(shí)沒那么復(fù)雜，靜下心來仔細(xì)思考一下提取過程就能理出一條線索，解決這個(gè)問題。先是樣本的裂解或者破碎，很多疑難樣本在這一步就已經(jīng)擋在了我們的面前，比如某些植物的根部以及較為堅(jiān)韌的莖部等。這些樣本破碎起來特別困難，尤其是當(dāng)大量樣品需要處理的時(shí)候，我們經(jīng)常會(huì)選擇通量較高的鋼珠打樣器，當(dāng)然還有傳統(tǒng)的液氮研磨，但這兩種方法要么費(fèi)時(shí)間，要么打不透，這個(gè)時(shí)候我們就需要一些新的思路，比如使用纖維素酶或者果膠酶處理，電動(dòng)組織研磨器等等。

 

破碎之后我們需要裂解細(xì)胞，目前常用的方法有 SDS（十二烷基硫酸鈉）法和 CTAB（十六烷基三甲基溴化銨）法，SDS 法比較溫和，容易保證 DNA 的完整性，而 CTAB 法則較為強(qiáng)烈，當(dāng)植物樣本成分復(fù)雜，多糖多酚含量較高時(shí)，一般會(huì)選用 CTAB 來進(jìn)行裂解。

 

有一些樣本比較惡心，比如痰液、精液等，這類樣本的特點(diǎn)是比較粘稠，提取前需要我們將它們稀釋，以痰液的為例，需要加入 DTT（二硫蘇糖醇）、Sacomanno 液（乙醇、聚乙二醇、利福平混合液）來液化；而精液 DNA 提取對(duì)象大多是精子，需要將精液離心后用 SWB（10 nmol Tris-HCl，10 mmol EDTA，1mol NaCl，pH 7.0）洗滌，接下來利用 SDS、DTT 解離，再用蛋白酶 K 消化。

 
DNA 提取的下一步是沉淀，而如果使用試劑盒就是上柱。相信許多同學(xué)在提取 DNA 的時(shí)候都在使用試劑盒，的確，自從核酸提取進(jìn)入了試劑盒時(shí)代之后，我們提取的效率大幅度提升。但是也出現(xiàn)了另一個(gè)問題，那就是在有限的樣本量的前提下，我們?nèi)绾文軌蜃ト〉胶哿康暮怂崮?？以提取血清血漿樣本中的游離核酸為例，常規(guī)的試劑盒很難處理這樣的情況，需要試劑盒中配備一些特殊組份來捕捉這些游離核酸，并幫助其結(jié)合在柱膜上，所以大家在購買試劑盒的時(shí)候需要做好選擇。

 

接下來就是洗脫或者溶解了，目前市面上所售的各種試劑盒大多采用硅基質(zhì)膜，這種膜的特點(diǎn)是在高 pH 值條件下與核酸分離，所以我們?nèi)绻贿x擇試劑盒中的洗脫液的話，我們可以用 pH 7.5-8.0 的水來代替，可以根據(jù)自己的需求來調(diào)整洗脫量，但洗脫時(shí)需要將膜完全覆蓋，這樣才能保證洗脫的率。這么看來，DNA 提取的過程是不是很清晰呢？