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6招教你選擇正確的ELISA試劑盒

發(fā)布時(shí)間:2019-08-02瀏覽次數(shù):1490返回列表

只有正確選用試劑盒,實(shí)驗(yàn)才能變得輕松。市場(chǎng)上的試劑盒品牌諸多,價(jià)格各異,質(zhì)量參差不齊,那么該如何選擇優(yōu)質(zhì)的試劑盒呢?只需6招,教你搞定ELISA試劑盒的選擇。

1、明確研究種屬
一般來(lái)說(shuō),廠家都會(huì)在產(chǎn)品名稱上標(biāo)明種屬,且為個(gè)單詞,檢索種屬的常用語(yǔ)言為英文。如下列的 VEGF ELISA 試劑盒(R&D Systems®,貨號(hào) DVE00)的個(gè)單詞為 human,即表明目標(biāo)種屬為人。
R&D Systems® ELISA 試劑盒所涵蓋的種屬,種類達(dá) 16 種之多。主要有:人(Human)、小鼠(Mouse)、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea Pig)、犬(Canine)、豬(Porcine)、馬(Equine)、貓(Feline)、牛(Bovine)、棉鼠(Cotton Rat)、病毒(Viral)、恒河猴(Rhesus Macaque)、兔(Rabbit)、肉毒梭菌(C.botulinum)、山羊(Goat)。
(1)一個(gè) ELISA 試劑盒,多個(gè)種屬
如果您需對(duì)不同物種的同一因子進(jìn)行定量,建議優(yōu)先尋找適用于多個(gè)種屬的 ELISA 試劑盒,產(chǎn)品介紹中會(huì)注明「Multi-species」。如 Endothelin-1 ELISA 試劑盒(R&D Systems®,貨號(hào) DET100)能夠定量檢測(cè)人、大鼠、小鼠的細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清血漿及尿液等樣本中的 Endothelin-1 蛋白。
(2)研究的種屬?zèng)]有對(duì)應(yīng)的 ELISA 試劑盒,怎么破?
① 前人摘樹(shù),后人乘涼,看看別人是否驗(yàn)證過(guò)相關(guān)種屬。R&D Systems®官網(wǎng)上,在發(fā)表文獻(xiàn)(Citation)的下方,有一個(gè)篩選框,可查看發(fā)表文獻(xiàn)中使用該產(chǎn)品研究的種屬及樣本信息。如 Human IL-6 ELISA 試劑盒(貨號(hào) D6050),在人、大鼠、小鼠、非人靈長(zhǎng)類、兔等種屬中均有過(guò)實(shí)驗(yàn)記錄,不妨一試。
② 聯(lián)系廠家技術(shù)部門,獲取目標(biāo)種屬與試劑盒驗(yàn)證種屬之間的交叉反應(yīng)性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),R&D Systems® 的試劑盒說(shuō)明書(shū)「Specificity」部分,會(huì)詳細(xì)描述目標(biāo)因子與相近因子的交叉反應(yīng)結(jié)果,反應(yīng)性高的,可自行驗(yàn)證。
③ 聯(lián)系廠家定制 ELISA 試劑盒。
④ 如果覺(jué)得自己的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)過(guò)關(guān),可以選擇抗體對(duì)自行開(kāi)發(fā),不少?gòu)S家均提供適用于 ELISA 開(kāi)發(fā)的抗體對(duì)(點(diǎn)擊查看 R&D Systems® 抗體對(duì)列表)。

2、明確樣本類型
不同廠家驗(yàn)證樣本類型不同,即使同一廠家不同試劑盒,其驗(yàn)證樣本類型也不盡相同。特別是復(fù)雜的血漿樣本,根據(jù)樣本處理方式的差異,分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿,因此購(gòu)買前需仔細(xì)核對(duì)。

3、預(yù)測(cè)目標(biāo)因子的濃度
一般來(lái)說(shuō),待測(cè)因子可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或資料獲得參考的檢測(cè)范圍,且正常人與疾病狀態(tài)存在差異。如熱門炎癥因子 IL-6,正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL,病人會(huì)顯著增高,CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。
因而,必要時(shí)進(jìn)行樣本的稀釋及選擇合適檢測(cè)范圍的試劑盒其重要。若濃度太低,可選擇高敏試劑盒;若不確定待測(cè)濃度或樣本間濃度差異較大,建議使用檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍更寬的化學(xué)發(fā)光法ELISA試劑盒。
如同樣為IL-6 ELISA 試劑盒,各類型檢測(cè)范圍差異較大,需要根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的試劑盒:

4、檢查試劑盒進(jìn)行過(guò)哪些質(zhì)控?
質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)在說(shuō)明書(shū)中即可找到,在購(gòu)買前檢查試劑盒是否進(jìn)行過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控實(shí)驗(yàn)。比如 R&D Systems® 的 Quantikine® 系列試劑盒,每一個(gè)產(chǎn)品在面市前,均需要經(jīng)過(guò)批次內(nèi)(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)的度檢測(cè)、摻入回收實(shí)驗(yàn)、線性稀釋實(shí)驗(yàn)及交叉反應(yīng)測(cè)試,從而確保的結(jié)果重現(xiàn)性及準(zhǔn)確性。

5、確定需檢測(cè)的因子數(shù)量
如果待測(cè)因子超過(guò)5個(gè),且樣本量較小時(shí),單因子ELISA檢測(cè)方法并不是zui佳選擇。建議考慮多因子檢測(cè)方法,如固相芯片(樣本數(shù)量一般5個(gè)以內(nèi),檢測(cè)指標(biāo)可達(dá)上百個(gè))及 Luminex 液相芯片方法 (檢測(cè)樣本多達(dá) 80個(gè),檢測(cè)指標(biāo)多達(dá) 50 個(gè))或微流控ELISA檢測(cè)系統(tǒng) Ella??晒?jié)約樣本及時(shí)間成本,也可保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

6、預(yù)算評(píng)估

預(yù)算往往是大家優(yōu)先考慮的,實(shí)際上,不能夠一味講究產(chǎn)品價(jià)格,更需要考慮。生物學(xué)是其嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué),一致性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是基金、文章等評(píng)審過(guò)程中必不可少的因素,即使低廉的價(jià)格,不能夠重現(xiàn)結(jié)果,也是資源的另一種浪費(fèi)。








 

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