標(biāo)簽：半定量RT-PCR 古朵生物 定量RT-PCR

  半定量RT-PCR和定量RT-PCR的區(qū)別

  定量PCR較半定量準(zhǔn)確，可實(shí)時定量。理論上有1個copy的差別就能區(qū)分開。如果你只想看看大致趨勢，半定量不失為一種快速的方法?，F(xiàn)在一些別的刊物上還有半定量的結(jié)果，如plant cell, plant physiology, genome biology等。

  半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(semi-quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction ,SqRT-PCR)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量RNA測定方法，通過mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并測定PCR產(chǎn)物的數(shù)量，可以推測樣品中特異mRNA的相對數(shù)量。以半定量RT-PCR為基礎(chǔ)建立起來的mRNA含量測定技術(shù)，較含內(nèi)標(biāo)化的RT-PCR定量測定的mRNA的方法geng為簡便可行。這種方法不另設(shè)‘內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)',排除了倆對不同引物之間的相互抑制和靈敏讀差異，而且具有明顯的劑量-效益關(guān)系和良好的重復(fù)性。

  步驟，1。抽提RNA，2。反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，3。以cDNA為模板做PCR!

  注意：步驟1，RNA抽提質(zhì)量一定要好，注意污染。內(nèi)參的選擇，常用的有βactin和GAPDH倆中。步驟3，半定量RT-PCR應(yīng)該再兩管中進(jìn)行，既內(nèi)參和目的基因各一管，這樣便于控制，做圖的時候可以放在一各泳道里跑!指數(shù)期和平臺期一定要摸清楚!

  定量RT-PCR(quantitatie reerse transcription and polymerase Chain reaction ,qRT-PCR)是在用一步法或兩步法，在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。有相對定量和dui定量兩種分析方法，dui定量的目的是測定目的基因在樣本中的分子數(shù)目，即通常所說的拷貝數(shù)。相對定量的目的是測定目的基因在兩個或多個樣本中的含量的相對比例，而不需要知道它們在每個樣本中的拷貝數(shù)。另外，與傳統(tǒng)的PCR技術(shù)相比，Real-time Q-PCR的不足之處是：

  (1)由于運(yùn)用了封閉的檢測，減少了擴(kuò)增后電泳的檢測步驟，因此也就不能監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的大小;(2)因?yàn)闊晒馑胤N類以及檢測光源的局限性，從而相對地限制了real-time Q-PCR的復(fù)合式(multiplex)檢測的應(yīng)用能力;

  (3)目前real-time Q-PCR實(shí)驗(yàn)成本比較高，從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。

  半定量RT-PCR和定量RT-PCR的區(qū)別上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量”的方針。