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胎牛血清給細(xì)胞帶來(lái)的益處

發(fā)布時(shí)間:2020-09-24瀏覽次數(shù):1086返回列表

胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中常用必備的添加培養(yǎng)基。它營(yíng)養(yǎng)豐富,大約含有三四百種不同成分,具有基礎(chǔ)培養(yǎng)基所不具備的營(yíng)養(yǎng)因子。

它給細(xì)胞提供的益處主要有六個(gè)方面

1>提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的天然激素或天然的生長(zhǎng)因子。

2>提供天然的結(jié)合蛋白,能識(shí)別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和激素等,能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白(albumin)即具有上述功能,并對(duì)細(xì)胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。

又如胎牛血清中富含胎球蛋白(Fetuin),具有多個(gè)鈣離子結(jié)合位點(diǎn),因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。

3>天然含有粘附蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,促進(jìn)細(xì)胞的附著、鋪展。

4>提供解毒功能。這主要通過(guò)血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結(jié)合來(lái)完成的。如金屬硫蛋白,對(duì)多種重金屬有高度親和性,并可清除細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境中的氧自由基(·O),具有很強(qiáng)的抗氧化活性,可防止細(xì)胞衰老。

5>提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。

6>提供蛋白酶抑制劑,使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷。因此在細(xì)胞消化時(shí),常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。



由于胎牛血清幾乎是通用的生長(zhǎng)添加物,適合動(dòng)物、人和昆蟲(chóng)細(xì)胞等許多類型細(xì)胞的培養(yǎng),因此使用血清不需要為每一類細(xì)胞優(yōu)化培養(yǎng)基,節(jié)省了大量時(shí)間和精力。

血清保存注意事項(xiàng):

(1)需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?br />
(2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。

(4)一般廠商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清。

(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量??捎秒x心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,geng換另一批號(hào)的血清。

(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破會(huì)而影響血清質(zhì)