支原體污染檢測方法

一般根據(jù)支原體種類不同，采取不同的方法進行檢測。目前常用的檢測方法有：

1. 試劑盒檢測法：

目前已有專門做支原體檢測的試劑盒，可以用細胞滴片進行檢測。

2. 觀察細胞的形態(tài)和生長特征：

支原體污染比較嚴重時可出現(xiàn)生長減慢，有的培養(yǎng)基pH明顯變酸，并出現(xiàn)細胞病變，以此可依次對支原體污染進行檢測，但有些情況下支原體污染引起的病變特征與病毒感染相似，因此不能準-確診斷。

3. 分離培養(yǎng)法：

大多數(shù)支原體可出現(xiàn)特有的典型菌落。因而可依次盡心檢測，該方法準-確、可-靠，但時間長，敏感性不夠高。

4. DNA結(jié)合熒光素染色法：

利用熒光染劑（bisbenzimide,Hoechst 33258）偵測支原體污染。熒光染料會結(jié)合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區(qū)域，因為支原體DNA中A-T含量占多數(shù)（55～80%），所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經(jīng)染色后，在細胞核外與細胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點，即為支原體之DNA，證明有支原體之污染。

5. 電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法：電子顯微鏡或者免疫電鏡下對樣本進行觀察，此法較準-確，但受條件限制，時間長，敏感性不高。

6. 間接免疫熒光法和免疫印跡：簡便、快速、特異性強。

未污染的細胞、支原體污染細胞、電鏡檢測

支原體污染預(yù)防及處理

組織細胞培養(yǎng)工作中，可以從以下幾方面來預(yù)防支原體的污染：

控制環(huán)境污染；嚴格實驗操作；細胞培養(yǎng)基和器材要保-證無菌；在細胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。

當細胞被支原體污染后若由于材料的特殊性必須保留可以采用一定的抗生素進行處理，對支原體蕞有抑制活性抗生素是四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等。目前，市場上已有了新一代支原體抗生素M-Plasmocin，能有-效的殺滅支原體，又不影響細胞本身的代謝，而且處理過的細胞不會重新感染支原體。另外，配合支原體檢測試劑盒可以幫助盡快發(fā)現(xiàn)支原體的污染。

支原體污染后果

細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時，會嚴重的影響實驗的結(jié)果。而細菌、真菌等之微生物污染時，較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時，細胞之外觀較無明顯變化，但是其污染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化