古朵技術(shù)方向| 常用抗凝劑的配制及用法

  在醫(yī)學(xué)實驗中常需動物的全身抗凝，采出的全血或血漿有的也需加入適當(dāng)?shù)目鼓齽┛鼓?。對抗凝劑的要求是：用量少、溶解度大、不帶進(jìn)干擾實驗的雜質(zhì)。

  一、肝素

  (1)肝素抗凝作用原理

  肝素的抗凝作用很強(qiáng),作死亡復(fù)蘇等實驗時,常用它作動物全身抗凝劑，肝素的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力，阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等作用，從而使血液不發(fā)生凝固。

  (2)配制和用量

  純的肝素10mg能抗凝65~125 ml血液(按lmg等于125U，10~20U能抗1 ml血液計)。但由于肝素制劑的純度高低以及其保存時間長短不等，因而其抗凝效果也不相同。一般可配成1%肝素生理鹽溶液，用時取0.1毫升于試管內(nèi)，100℃烘干，每管能抗凝5～10ml血液。

  也可將抽血注射器用配好肝素濕潤一下管壁，直接抽血至注射器內(nèi)而使血液不凝。在動物實驗作全身抗凝時，一般劑量為：大白鼠2.5～3.0mg/200～300g體質(zhì)量，兔10mg/kg體質(zhì)量，狗5～10mg/kg體質(zhì)量。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點，因此當(dāng)用鹽析法分離蛋白質(zhì)作蛋白質(zhì)各部分的測定時，不可采用肝素。市售的肝素鈉溶液每毫升含肝素12500U，相當(dāng)于100mg。

  二、草酸鹽合劑

  (1)原理

  草酸胺能使血細(xì)胞略為膨大，而草酸鉀能使血細(xì)胞微縮小，因此草酸銨與草酸鉀按3：2比例配置，可使血細(xì)胞體積保持不變;加福爾馬林則能防止微生物在血中繁殖。此抗凝劑適于作紅細(xì)胞比積測定。

  (2)配制方法及用量

  草酸銨1.2g、草酸鉀0.8g、福爾馬林1.0ml、蒸餾水加至100ml每毫升血加草酸鹽合劑0.1ml(即相當(dāng)草酸銨1.2mg，草酸鉀0.8mg)。根據(jù)取血量將計算好的草酸鹽劑量加入玻璃容器內(nèi)烤干備用。如取0.5ml于試管，烘干后每管可使5ml血不凝固。

  (3)注意事項

  草酸的作用在于能夠沉淀血凝過程中所必需的鈣離子，而達(dá)到抗凝目的。用時注意加的量應(yīng)適中，不能過多，以免妨礙去蛋白質(zhì)血濾液的制取。不適用于血液內(nèi)鈣或鉀的測定，也不能用于血液非蛋白氮測定。

  三、枸櫞酸鈉

  常配成3～5%水溶液。也可直接加粉劑，每毫升血加3～5mg，即可達(dá)到抗凝目的。

  枸櫞酸鈉可使鈣失去活性，防止凝血。但其抗凝作用較差，堿性較強(qiáng)，不宜作化學(xué)檢驗之用。僅可用于紅細(xì)胞沉降速度測定。急性血壓測定實驗所用枸櫞酸鈉為5～6%溶液。

  四、草酸鉀

  (一)原理和注意事項

  草酸鉀為常用的抗凝劑。其與血液混合后可迅速與血液中的鈣離子結(jié)合，形成不溶解的草酸鈣，使血液不凝固。常用于非蛋白氮測定，但不適用于測定鉀和鈣。草酸鹽能抑制乳酸脫氫酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故應(yīng)注意。

  (二)配制及使用方法

  取草酸鉀10g，加蒸餾水少許使溶解，再加蒸餾水至100ml。配制成10%水溶液，如每管加0.1ml則可使5~10ml血不凝。一般如作微量檢驗，用血量較少，可配制成2%溶液，如每管加0.1ml可使1~2ml血液不凝。

  五、乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)

  EDTA對血液中鈣離子有很大的親和力，能與鈣離子絡(luò)合而使血液抗凝。每0.8mg可抗凝1ml血液。除不能用于血漿中鈣、鈉及含氮物質(zhì)之測定外，適用于多種抗凝。

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