單克隆抗體制備成功的關(guān)鍵：抗原要求及分類

  抗原又稱作免疫原，是指能引起抗體生成的物質(zhì)，能夠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體或致敏淋巴細胞?？乖哂忻庖咴裕軌蛞疬B續(xù)的免疫反應(yīng)。

  原則上任何可以誘發(fā)免疫反應(yīng)的物質(zhì)都可以做抗原，包括天然抗原和人工合成抗原，如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、核酸等。但是一個免疫原強的抗體應(yīng)滿足以下的要求：

  (1) 分子量足夠大。抗原決定簇一般有6-8個氨基酸殘基構(gòu)成，平均5-10kD才會有一個抗原決定簇，因此分子量太小的多肽或蛋白難以形成一個抗原決定簇。

  (2) 外源性要強。機體可以對自身物質(zhì)形成免疫耐受，因此抗原和體內(nèi)物質(zhì)完全一樣或者相似就難以引起免疫應(yīng)答，自然也就難以產(chǎn)生抗體了。

  (3) 結(jié)構(gòu)盡量復(fù)雜。越是結(jié)構(gòu)簡單的物質(zhì)，免疫原性越差。簡單重復(fù)的物質(zhì)一般不具有免疫原性。

  (4) 可降解性好。

  抗原按照其來源一般可分為：

  1. 純化的天然蛋白質(zhì)

  天然蛋白經(jīng)過修飾，具有線性表位和結(jié)構(gòu)表達，結(jié)構(gòu)相對來說，比較復(fù)雜，屬于比較理想的抗原。但由于天然蛋白純化要求比較高，難以獲得高純度的天然蛋白，會影響免疫和抗體純化。因此一般只選擇在機體內(nèi)表達量比較高的蛋白作為抗原。

  2. 純化的重組蛋白

  重組蛋白純化技術(shù)比較多，容易獲得高純度的蛋白，并且種類、結(jié)構(gòu)容易檢測。選擇重組蛋白要清楚這些蛋白是否帶有標(biāo)簽，因為為了方便純化重組蛋白，一般會添加一些標(biāo)簽，比如GST、His、Myc、Fc、Flag等。這些帶標(biāo)簽的抗原在免疫動物體內(nèi)戶產(chǎn)品帶有標(biāo)簽的抗體，需要在抗體純化過程中將這些標(biāo)簽去掉。

  3. 人工合成的多肽

  合成的多肽可以在不同的區(qū)域作為抗原進行免疫。

  4. 小分子物質(zhì)

  分子量大小一般不會超過1000 Da，但小于300 Da就難以獲得高親和力的抗體，因此常會鏈接載體后才會進行動物免疫。

  5. 組織、全細胞或細胞組分

  有時由于抗原靶點不清楚，會選擇組織、全細胞或細胞組分作為抗原進行動物免疫。如果以組織作為抗原，則需要切除新鮮的組織，用生理鹽水洗干凈，然后用濾網(wǎng)和研杵將其分離成單個細胞。

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