小鼠IgGELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法：

  基本原理：

  本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠IgG單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的IgG與單抗結(jié)合，加入酶標(biāo)抗體，形成免疫復(fù)合物連接在板上，加入酶底物TMB，出現(xiàn)藍(lán)色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測(cè)OD值，IgG濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中IgG濃度。

  小鼠IgGELISA試劑盒操作步驟：

  實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

  1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

  2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜,37℃反應(yīng)60分鐘。

  3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

  4.每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液)100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

  5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

  6.依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。

  7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

  8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

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