ELISA試驗(yàn)原理及應(yīng)用

  ELISA(enzymelinkedImmunosorbentAssay)的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)中，常應(yīng)用ELISA試驗(yàn)來檢測蛋白質(zhì)表達(dá)量或者活性狀態(tài)，檢測化學(xué)修飾(磷酸化與去磷酸化)。

  結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時(shí)，受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。

  elisa可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：

  (1)固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"(immunosorbent);

  (2)酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"(conjugate);

  (3)酶反應(yīng)的底物。

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