小鼠丙二醛(MDA)新手操作方法

  檢測范圍：

  0.3nmol/L -8 nmol/L

  使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中丙二醛(MDA)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠丙二醛(MDA)水平。用純化的小鼠丙二醛(MDA)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入丙二醛(MDA)，再與HRP標記的丙二醛(MDA)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙二醛(MDA)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中小鼠丙二醛(MDA)濃度。

  標本要求 1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融2.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

  加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

  溫育：操作同3。

  洗滌：操作同5。

  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

  終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

  注意事項

  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

  3.各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線，好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

  8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  保存條件及有效期 1.試劑盒保存：2-8℃ 2.有效期：6個月

  小鼠丙二醛試劑盒上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務質(zhì)量"的方針