技術(shù)分享：免疫熒光鑒定步驟

  為了好的幫助客戶提供真實(shí)的原代細(xì)胞，使用免疫熒光鑒定出提取的細(xì)胞類型，免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。 古朵生物技術(shù)人員提供的免疫熒光細(xì)胞鑒定的步驟，僅做參考：

  1.細(xì)胞爬片

  取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培養(yǎng)基1mL，加入細(xì)胞0.02million個(gè)/孔。置培養(yǎng)箱2h或過夜。

  2.固定

  細(xì)胞爬片后，吸出培養(yǎng)基，用PBS洗一遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可后一次不吸出PBS，放4℃過夜。

  3.破膜封閉

  將玻片除去水分，置于培養(yǎng)皿支撐物上，

  玻璃片封閉液配置：0.5% Trition X-100與PBS 1:1混合，再加10% 血清，

  取50uL破膜封閉液滴于防水膜上，將玻片上有細(xì)胞的一面蓋上2h。

  4.一抗孵育

  一抗配置：抗體與PBS 1:100(200)稀釋

  破膜后，取50uL一抗于防水膜上(濕盒中)，將玻片有細(xì)胞的一面蓋上置于4℃(多可放置一周)

  陰性對(duì)照組可用PBS代替一抗。

  5.二抗孵育

  PBS洗3×5min/次，

  二抗混合液配置：二抗：PBS=1:500

  DAPI:PBS=1:1000

  防水膜上滴50uL二抗混合液，蓋上玻片，避光，室溫放置2h。

  6.包埋

  PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，將有細(xì)胞的一面蓋上。

  上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵(lì)志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠(yuǎn)銷多個(gè)國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準(zhǔn)則、以市場(chǎng)需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒