古朵帶您了解、ELISA試劑盒檢測方法的由來和原理

  酶聯(lián)免疫檢測技能(elisa試劑盒檢測辦法)是20世紀(jì)60年代晚期發(fā)展起來的一種免疫學(xué)檢測辦法，是現(xiàn)在zui廣泛使用的符號免疫技能。1966年Nakene和Pierce一起發(fā)表了《酶標(biāo)抗體：制備和抗原定位中的使用》，首要提出了酶聯(lián)免疫技能(ELISA試劑盒檢測辦法)的基本原理。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表《ELISA KIT辦法吸附實(shí)驗測定IgG含量》一文，使酶聯(lián)免疫(ELISA試劑盒檢測)技能成為一種有用的檢測液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的辦法?，F(xiàn)在酶聯(lián)免疫(ELISA試劑盒)檢測技能已廣泛用于免疫學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)等。因為其具有靈敏度高、試劑安穩(wěn)、設(shè)備簡略、操作安全等長處，近幾年也將其使用到食物領(lǐng)域中來檢測某些食物中的生理活性物質(zhì)。

  一、基本概念

  1、免疫：抽象地歸納起來，免疫就是人和動物機(jī)體防御、掃除外來物質(zhì)(異物)進(jìn)人體內(nèi)，一起識別和鏟除體內(nèi)逝世、變性物質(zhì)和平定體內(nèi)叛亂分子驟變細(xì)胞，以維護(hù)和安穩(wěn)本身的防護(hù)機(jī)制。

  2、抗原：抗原是指那些可以誘導(dǎo)機(jī)體的免疫系統(tǒng)發(fā)作免疫應(yīng)對，發(fā)作抗體和致敏效應(yīng)淋巴細(xì)胞，并在體表里與之特異性結(jié)合，發(fā)作免疫反響的物質(zhì)。

  3、抗體：是能與相應(yīng)的抗原專一性結(jié)合的蛋白質(zhì)分子，和機(jī)體其他生物大分子相同是細(xì)胞的產(chǎn)品，排泄到體液中或表現(xiàn)在細(xì)胞表面上。

  4、抗原、抗體反響：抗原和抗體在體外的反響亦稱血清學(xué)反響。這類反響可憑借免疫學(xué)辦法進(jìn)行檢測。

  二、抗體定量檢測辦法及其原理

  定量分析抗體的常用辦法有分散法、酶聯(lián)免疫吸附法和火箭免疫電泳法等。

  1、免疫分散法

  a、單向免疫分散法

  原理：將待檢抗原滴加于含相應(yīng)抗體的瓊脂板小孔中，經(jīng)必定時刻分散后。構(gòu)成乳白色的沉積壞，在必定濃度范圍內(nèi)，抗原的含量與沉積壞直徑成正比?？梢韵扔眉褐煌瑵舛鹊囊?guī)范抗原制成規(guī)范曲線，再依據(jù)測驗樣品沉積環(huán)直徑的巨細(xì)，從規(guī)范曲線上查出樣品中抗原的相應(yīng)含量。

  b、雙向免疫分散法

  原理：可溶性抗原與已知可溶性抗體分別參加相鄰的瓊脂糖凝膠板上的小孔內(nèi)，在電解質(zhì)存在下讓它們相互向?qū)Ψ椒稚ⅰ．?dāng)兩者在zui恰當(dāng)份額處相遇時，即構(gòu)成一條明晰的沉積線。依據(jù)稀釋度與已知規(guī)范品稀釋度之比，可核算出抗體含量。

  2、火箭免疫電泳法

  原理：抗原在電場力的效果下向前移動，當(dāng)抗原在通過含有必定量單一抗體的瓊脂凝膠時，即構(gòu)成抗原抗體復(fù)合物，份額適宜即沉積下來。因抗體遷移率低，而抗原隨電泳向前移動，因而使抗原、抗體構(gòu)成圓錐形的沉積峰。在必定濃度范圍內(nèi)，峰的高度與抗原的濃度呈正比。

  3、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

  原理：ELISA可用于測定抗體，也可用于檢測杭原。其基本原理是選用抗原與抗體的特異反響將待測物與酶銜接，然后通過酶與底物發(fā)作色彩反響，用于定量測定。測定的對象可所以抗體也可所以抗原。3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑); ②酶符號的抗原或抗體(符號物); ③酶效果的底物(顯色劑)。

  ELISA進(jìn)程包括：抗原吸附在固相載體上，這個進(jìn)程稱為包被，加待測抗體, 再加相應(yīng)酶符號抗體，生成抗原--待測抗體--酶符號抗體的復(fù)合物，再與該酶的底物反響生成有色產(chǎn)品。憑借分光光度計的光吸收核算抗體的量。

  依據(jù)檢測目的和操作過程不同，有以下三種類型的常用辦法：

  a、間接法

  此法是測定抗體zui常用的辦法。將已知抗原吸附于固相載體。加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗體)與之結(jié)合。洗刷后，加人酶標(biāo)抗球蛋白抗體(酶標(biāo)抗抗體)和底物進(jìn)行測定。

  b、雙抗體夾心法

  此法常用于測定抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加人待檢標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合。溫育后洗刷，加人酶標(biāo)板中。

  c、競爭法

  此法可用于抗原和半抗原的定量測定，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體。參加待測抗原和必定量的酶標(biāo)已知抗原，使二者竟?fàn)幣c固相抗體結(jié)合;通過洗刷別離，zui后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測抗原含量呈負(fù)相關(guān)。

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