Elisa實驗：谷胱甘膚ELISA測定實驗

  谷胱甘膚ELISA簡介:

  谷胱甘膚 (glutathione,r-glutamyl cysteingl tglycine，GSH) 是一種含-酷胺鍵和統(tǒng)基的三膚，由氨酸、半胱氨酸及臺氨酸組成，存在于幾乎身體的每一個細胞。谷胱甘膚能幫助保持正常的免疫系統(tǒng)功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用半胱氨酸上的流基為其活性基團(故常簡寫為G-SH)，易與某些藥物、毒素等結合，使其具有整合解毒作用。

  谷胱甘膚試劑盒操作步驟:

  材料準備

  1. 包被液: 0.05 mol (pH9.6) 碳酸鹽緩中液: Na2C03 0.159 g,NaHCO3 0.294 g，用蒸水溶解后，定容至100ml.

  2.PBS-T洗滌液: 0.01mol/ pH7.4磷酸鹽-復化鈉緩液: NaC1 8.0 g, KH2P04 0.2 g,Na2HP04·12H20 2.9 g,KCI0.2 9，吐溫-20 0.5 l，用蒸餾水溶解后，定容至1000 ml。

  3.底物溶液3，3”，5,5-四甲基聯苯胺 (TMB) 貯存液及應用液:(1) 0.1 mol pH6.8 PB: Na2HPO4·12H20 1.09 g, NaH2P04 H20 6.05 g,蒸水溶解后定容至500 ml，4°C保存?zhèn)溆谩?

  (2) TMB貯備液: TMB 60 mg 于10 ml二甲基亞碩 (DMSO) 中4C保存?zhèn)溆?3) TMB應用液: 臨用前取0.1 moll pH6.0 PBS 10 ml，TMB備液100 l，30%H202 15 l混約即可

  谷胱甘膚ELISA實驗步驟：

  1.抗體包被

  (1)抗體用包被液稀釋至20 ug/ml，加入聚苯乙烯反應板中每孔100 ul，加蓋后放4C過夜(2) 傾去孔內液體，加入洗滌液后靜置3 min，傾盡洗滌液，重復洗滌3次。

  (3) 將反應板口在吸水紙上，以除盡液體。

  2.封閉: 每孔加入200 ul閉液，37“C孵育60 min，然后洗滌3次。

  3.加入待測血清，37“C溫育1~2 h，洗滌3次。用稀釋液作對照孔，標準曲線的制備是用不容稀釋度的純GST-T。加酶標抗體: 按要求稀釋抗GST--gG-HRP，每100 l，37C溫育1 h，然后洗滌5次，扣在吸水紙上吸干水分

  5.顯色: 加入TMB應用液，置室溫反應15-30 min，加入50 ul2 mol H2S04，穩(wěn)定3-5 min，即可比色

  6.比色:用酶標儀，以PBS-T孔為對照，波長450 nm，測各孔光吸收度(A)，查標準曲線，即可測得GST-T含量.

  谷胱甘膚ELISA上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術相關產品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向，不斷開發(fā)高質量的新產品，提供客戶滿意的綜合服務質量"的方針。