古朵生物| ELISA實驗之樣本前期的處理方法

  ELISA實驗檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。接下來古朵生物技術(shù)小編就為大家介紹一下不同樣本在實驗之前的處理方法。

  一、均質(zhì)

  1、組織樣本：肉、肝食品類切細(xì)，用絞肉機反復(fù)絞碎，混合均勻。

  2、水產(chǎn)樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細(xì)，用均質(zhì)器均漿。原料表面較臟時，需適當(dāng)用蒸餾水清洗。

  3、蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。

  4、水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。

  二、振蕩提取

  將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，使提取溶劑與容器內(nèi)的樣品充分接觸以深入到樣本組織內(nèi)部，提取待測組分。振蕩方式主要就是用振蕩器進行上下、往返式振蕩、手搖式上下振蕩。在組織樣本中加入有機溶劑之間提取時，應(yīng)邊加邊振蕩，防止組織凝結(jié)成團，不利于提取。

  三、濃縮

  由于凈化過程中引入的溶劑，可能會降低待測組分的濃度或者不適宜直接分析，需要去除全部有機溶劑。即試劑盒前處理步驟中把樣本在60℃氮氣下吹干，再用復(fù)溶液溶解干燥殘留物。濃縮方式包括用氮氣吹干除雜、壓縮空氣吹干除雜等。

  請注意：

  1、在吹干樣本之前，用甲醇清洗針頭，防止雜質(zhì)干擾。

  2、在吹樣本時，針頭應(yīng)在液面上空，避免與樣本接觸，防止產(chǎn)生交叉污染。

  3、樣本吹干后應(yīng)立即取下，避免吹的時間過長，影響終檢測結(jié)果。

  4、不同的藥物，吹干后樣本的保質(zhì)期不同，提倡待樣本回到室溫后立即復(fù)溶。

  四、乳化現(xiàn)象

  在用有機溶劑提取過程中，如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，解決的方法有：

  1、用細(xì)頭輕輕的攪拌，破壞乳化后，再重復(fù)離心。

  2、再加入適量的提取劑，重新振蕩。注意離心后要保證樣本的稀釋倍數(shù)不變。

  五、凈化

  經(jīng)過提取的待測組分中通常含有一些會干擾試劑盒中抗原抗體反應(yīng)的雜質(zhì)或者是含有與待測物結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)。將待測組分與雜質(zhì)分離的過程，我們稱為試劑盒中樣本的凈化。在我們現(xiàn)有的試劑盒前處理方法中涉及到的常見的凈化是液液分配法。比如，用復(fù)溶液溶解干燥殘留物之前先加入適量的正己烷，在加入正己烷和復(fù)溶液渦動后如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，可以用60℃水浴加熱，至乳化現(xiàn)象消失或減弱后，加大離心轉(zhuǎn)速進行離心。

  實驗樣本的處理可謂是ELISA實驗的關(guān)鍵步驟之一，所以科研朋友一定要多加注意。

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