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使用反相色譜柱須掌握的要點
發(fā)布時間:2018-04-09瀏覽次數(shù):2826返回列表
1、色譜柱的平衡
反相色譜柱由工廠測試后是保存在乙腈/水中的。新柱應(yīng)先使用10-20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。 每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱,您就會在處理問題方面獲得大的”補償”,而且您的色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟:
平衡開始時將流速緩慢地提高,用流動相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低,則需要較長的時間來平衡)
如果使用的流動相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意用純水”過渡”即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡; 分析結(jié)束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護(hù)柱子。
2、色譜柱的再生
長期使用的色譜柱,往往柱效會下降(柱子的理論塔板數(shù)減低)。可以對色譜柱進(jìn)行再生,在有條件的實驗室應(yīng)使用一個廉價的泵進(jìn)行柱子的再生。
3、色譜柱的維護(hù)
使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度);
大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2-7.5,盡量不超過該色譜柱的pH范圍;
避免流動相組成及性的劇烈變化;
流動相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理;
如果使用性或離子性的緩沖溶液作流動相,應(yīng)在實驗完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中;
氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。