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公司名稱:北京綠百草科技發(fā)展有限公司
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電話:400-600-6161
手機(jī):13521740814
郵件:pub02@greenherbs.com.cn
地址:北京市昌平區(qū)企業(yè)墅上區(qū)4-3
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使用TSKgel UP-SW3000進(jìn)行單克隆抗體分析
發(fā)布時(shí)間:2022-07-29瀏覽次數(shù):1148返回列表
使用TSKgel UP-SW3000進(jìn)行單克隆抗體分析
近年來,抗體藥物市場在逐步擴(kuò)大,未來的幾年仍將持續(xù)發(fā)展。越來越多的抗體藥物將會(huì)應(yīng)用到疾病的治療中。尺寸排阻色譜法(SEC)廣泛用于抗體中單體,二聚體,聚集體和片段等的分析和定量中。為實(shí)現(xiàn)高的分離度和快的分析時(shí)間,色譜柱生產(chǎn)廠家優(yōu)化了填料顆?;瘜W(xué)和色譜柱填充方法,近年來,2μm和亞2μm粒徑SEC色譜柱相繼問世.
通過這種方法使得一些樣品的分析結(jié)果得到了改善,但由于一些新型抗體藥物具有高度的疏水性,抗體在色譜柱凝膠基質(zhì)上的非特異性吸附使得抗體藥物的分析仍然具有一定的挑戰(zhàn)。在本應(yīng)用指南中,使用TSKgel®UP-SW3000,2μm SEC色譜柱分析單克隆抗體(mAb),并在pH 6.7的磷酸鈉緩沖液中添加15%IPA。如圖所示,峰分離度和保留時(shí)間變化均不受影響。
HPLC實(shí)驗(yàn)條件
色譜柱:TSKgel UP-SW3000,2μm,4.6 mm ID x 30 cm
儀 器:Chromeleon®(7.2版)運(yùn)行的UltiMate®3000 UHPLC系統(tǒng)
流動(dòng)相:100 mmol / L KH2PO4 / Na2HPO4中的15%IPA,pH 6.7,100 mmol / L Na2SO4、0.05%NaN3
流 速:0.30 mL / min
檢 測:紫外線@ 280 nm
溫 度:30?C
壓 力:22 MPa(大色譜柱壓力為34 MPa)
進(jìn)樣量:5μL,4 mg / mL
樣 品:USP mAb標(biāo)準(zhǔn)品
結(jié)果與討論
將USP mAb標(biāo)準(zhǔn)品注射到TSKgel UP-SW3000 4.6 mm ID×30 cm色譜柱上,利用磷酸鈉緩沖液pH 6.7為流動(dòng)相,樣品具有出色的重現(xiàn)性,如圖1所示。該圖顯示了以0.3 mL / min的流速連續(xù)進(jìn)樣14針USP mAb標(biāo)準(zhǔn)樣品,單體,二聚體,聚集體和碎片峰的保留時(shí)間幾乎不變,每次進(jìn)樣的峰寬和峰形非常一致。