導(dǎo)讀：如今PCR擴(kuò)增儀已經(jīng)越來越完善和智能化，對于選擇PCR擴(kuò)增儀我們需要關(guān)注兩個問題一個是溫度的控制，再者就是人性化的設(shè)計(jì)，下面我們具體去聊一聊這兩個影響因素。
一、溫度控制 
對普通PCR儀來說，溫度控制指標(biāo)主要是指溫度的準(zhǔn)確性、均勻性、以及升降溫速度，對梯度PCR儀來說，除了溫度的準(zhǔn)確性和均勻性、升降溫速度以外，還必須考慮儀器在梯度模式和標(biāo)準(zhǔn)模式下是否具有同樣的溫度特性。
 溫度的準(zhǔn)確性是指樣品孔溫度與設(shè)定溫度的一致性，它直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。如果排除樣品加入過程中的問題，對于PCR反應(yīng)而言重要的莫過于溫度控制的準(zhǔn)確性，由于PCR是一個幾何級數(shù)擴(kuò)增的過程，擴(kuò)增過程中退火溫度的細(xì)微變化會被放大而直接影響結(jié)果，不論是變性、退火還是延伸都需要準(zhǔn)確控制溫度，對退火溫度而言溫控顯的尤為重要，有時1度甚至0.5度的差異也能決定實(shí)驗(yàn)的成功與失敗，所謂差之毫厘，謬之千里。因而對PCR擴(kuò)增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量。
 溫度的均勻性是指樣品孔間的溫度差異，它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應(yīng)結(jié)果的一致性。我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有時用同樣的樣品，同樣的PCR反應(yīng)程序，后的結(jié)果竟然差異非常明顯，或許就是因?yàn)椴煌恢玫臏囟炔痪恍运?。一些使用過早期PCR儀的腦子格外靈光的研究人員偏愛使用PCR儀中間某幾個固定的孔，就是因?yàn)檫^往反復(fù)的教訓(xùn)和認(rèn)真的思索得出了這樣的結(jié)論，PCR儀的溫度均勻性不好，特別是外周的樣品孔情況差，很有可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果--即“位置的邊緣效應(yīng)”會影響結(jié)果的可重復(fù)性。正是這種位置效應(yīng)對定量PCR的結(jié)果的影響為明顯，所以后來才有Roche和Cobbett的離心式定量PCR的重大創(chuàng)新。
 溫度控制除了度，還有一個廠家喜歡大力宣傳的指標(biāo)--升降溫的速度。快的升降溫速度，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時間，能提高PCR反應(yīng)煌特異性。因此從本質(zhì)而言溫控方式就從以前相對穩(wěn)定耐用的機(jī)械式轉(zhuǎn)向了升降溫快速的半導(dǎo)體。除了機(jī)械本身的原因，影響升降溫速度的還有制作承托樣品管的基座模塊的材料的導(dǎo)熱性。
作為用戶來說，當(dāng)然愿意選擇升降溫速度快的，這就像汽車上好看的表面配置一樣容易看到，而內(nèi)在的穩(wěn)定性和耐用性往往是看不到的而容易被忽略。必須注意到，儀器的升降溫速度和樣品管中的樣品的升降溫速度并非同一回事，因?yàn)闃悠饭芘c基座接觸的緊密性、導(dǎo)熱性、鄰近樣品管的相互影響都會影響樣品的實(shí)際升降溫速度。
 現(xiàn)在的PCR儀一般具有兩種溫控模式，即模塊溫控模式（Block-control）和反應(yīng)管溫控模式）（tube-control）。在模塊溫控模式下，機(jī)器根據(jù)探se器直接探se的溫控模塊（即承載樣品的金屬臺）的溫度進(jìn)行控制，這種模式適用于長時間的靜態(tài)孵育（如連接、酶切、去磷酸化等）。反應(yīng)管溫控模式實(shí)際上是一種模擬試管/PCR板的溫控模式，根據(jù)探se器所探測到的溫控模塊的溫度由計(jì)算機(jī)計(jì)算出管內(nèi)/PCR板孔內(nèi)樣品液的溫度來進(jìn)行控制。一般說來，試管溫控為準(zhǔn)確，因?yàn)楣軆?nèi)樣品的溫度無法與溫控模塊同時達(dá)到預(yù)設(shè)溫度。特別是PCR反應(yīng)中的孵育過程一般都很短暫（30秒或短），如果采用只有模塊溫控模式的話，反應(yīng)混合物孵育的時間與程序設(shè)定的時間會有相當(dāng)大的差距。而反應(yīng)管控制的算法能自動補(bǔ)償時間，而且適合各種類型的反應(yīng)管，確保反應(yīng)混俁物按照程序設(shè)定的時間維持預(yù)設(shè)溫度。
有的PCR儀廠家推出了另一種溫控方式；熱敏電溫控模式。該方法將一個熱敏電插入一個專門的測量管中（管中裝有礦物油），反應(yīng)進(jìn)行時，將該測量管插入溫控模塊的樣品進(jìn)行檢測。他們認(rèn)為通過此途徑可以監(jiān)測反應(yīng)管內(nèi)樣品的實(shí)際溫度，但這種方法未免有些華而不實(shí)；（1）測量管中礦物油的溫度變化與實(shí)際反應(yīng)樣品的溫度變化未必一致；（2）因?yàn)闇y量管必須占用一個樣品孔，所以使用該溫控方式時就無法使用96孔PCR板作實(shí)驗(yàn)。
 二、儀器的功能性和人性化設(shè)計(jì) 當(dāng)然是越簡單方便的設(shè)計(jì)符合用戶的要求。
熱蓋--現(xiàn)在的PCR儀一般均配備熱蓋，熱蓋溫度設(shè)為105℃，使樣品管頂部的溫度達(dá)到105℃左右，蒸發(fā)的反應(yīng)液就不會產(chǎn)生凝集在管蓋上而改變反應(yīng)體積，這樣用戶就無需再向反應(yīng)管內(nèi)加石蠟油，直接減少后繼反應(yīng)的麻煩。如果是旋轉(zhuǎn)加壓的熱蓋就要特別小心，因?yàn)閴毫Φ竭_(dá)時沒有明顯的提示，用戶需要根據(jù)經(jīng)驗(yàn)將熱蓋旋到合適位置，不太容易掌握。如果過松，熱蓋沒有充分接觸反應(yīng)管而影響結(jié)果；如果過緊，則會導(dǎo)致反應(yīng)管變形，甚至可能造成熱蓋的機(jī)械故障。新的ESP技術(shù)是指熱蓋加熱時不接觸樣品管，避免加熱樣品管導(dǎo)致非特異產(chǎn)物，等加熱到設(shè)定溫度后熱蓋下降，將樣品管壓入加熱模塊，下降時間和壓力都由電子控制。
樣品基座--PCR反應(yīng)多在0.2或者0.5的管子中進(jìn)行，多數(shù)PCR儀也配備了不同的可換樣品槽適配不同的樣品管。eppendorf有一個有趣的設(shè)計(jì)，一個槽內(nèi)帶有0.2和0.5兩種不同樣品孔，不需換基座就可以分別使用兩種不同的反應(yīng)管，或者96孔板，加原位適配器就可以變成原位PCR了。避免了換基座的麻煩。當(dāng)然不同的反應(yīng)管不可以同時使用的，因?yàn)楦叨炔煌瑹嵘w不能作用。ABI的9700就可以換不同的樣品槽，樣品槽系列擴(kuò)增到從0.5到標(biāo)準(zhǔn)96孔，到雙384孔板，分別適合不同的需要，相當(dāng)靈活。
軟件--新的PCR儀都比較注重程序編寫的簡易性。大屏幕，顯示實(shí)時信息，，記憶存儲多個程序、自動斷電保護(hù)等都有助于實(shí)驗(yàn)室中的復(fù)雜環(huán)境使用。程序儲存方面，有人覺得儲存程序的多少似乎意義不太大，但是對于實(shí)驗(yàn)人員多、PCR儀每天運(yùn)作頻繁的實(shí)驗(yàn)室來說，每個使用者儲存自定義的PCR程序，確實(shí)能方便下一次的調(diào)用，會節(jié)約一些時間。