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熒光定量pcr儀雜交應(yīng)用相輔相成
發(fā)布時(shí)間:2014-04-01瀏覽次數(shù):1943返回列表
熒光定量pcr儀整個(gè)定義過程:光彈燈發(fā)出徽發(fā)光。通過戰(zhàn)鏡等光學(xué)組塊到達(dá)96孔板上。樣品中發(fā)射的熒光按服原路返回,在雙色鏡處,由于波長與人射光不同,因此可以透過該談到達(dá)濾鏡輪,診鏡是可以旋轉(zhuǎn)選擇不同戰(zhàn)鏡的一個(gè)部件,它可以使特定波長的光通過,從而達(dá)到區(qū)分產(chǎn)物的目的。通過逮鏡輪的熒光屏經(jīng)過多元鏡后被儀器自帶的CCD相機(jī)所摘捉到,從而產(chǎn)生一個(gè)熒光信號(hào)。
主要用途:
1.定量檢測:定旦:落因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)墓因食品檢側(cè)、病原體檢測。
2.相對(duì)定ri基因在不同組織中的表達(dá)差異、藥物療效考核。
3.點(diǎn)突變檢測:檢側(cè)與疾腳相關(guān)的等位爺因點(diǎn)突變。用于檢側(cè)羲因突變和墓因組的不往定性。
特別提示:本制品中使用的TakaRa Ex Tag'" HS是利用抗Taq杭體的Hot Start的DNA辛合欣,與其他公司的化學(xué)修飾皿Hot Start用DNA歡合曲相比,如果高硯處理時(shí)間過長.會(huì)使醉的活性下降,其PCR的擴(kuò)增效率、定址度都會(huì)受到影響,如果在PCf反應(yīng)前進(jìn)行模板的班變性。
4.實(shí)臉結(jié)果分析
反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)Real Time PCR的擴(kuò)姍曲線和融解曲線,進(jìn)行PCR定I時(shí)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線等。
建議采用兩步法PCR反應(yīng)程序,如果該程序得不到良好的實(shí)臉結(jié)果時(shí),再進(jìn)行PCR條件的優(yōu)化。由于使用值較低的引物等原因,兩步法PCR反應(yīng)擴(kuò)幼性能較差時(shí),可以嘗試進(jìn)斤三步法PCR擴(kuò)增反應(yīng)。