細胞培養(yǎng)方方法及預(yù)防污染的方法
發(fā)布時間：2024-03-18瀏覽次數(shù)：774返回列表
細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù)，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，細胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺?。
細胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細胞膜，模擬體內(nèi)生存環(huán)境，在無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下，使其生長繁殖并維持結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。目前細胞培養(yǎng)方式主要包括以下三種：
1、貼壁培養(yǎng)
貼壁培養(yǎng)主要適用于貼壁依賴性細胞。此類需要相互依賴，需貼附于不起化學作用的物質(zhì)（玻璃或塑料等無活性物質(zhì)）的表面生長、生存和維持，并終在附著面生長至單層，鋪滿平面時便會發(fā)生接觸抑制。大多數(shù)動物細胞，包括非淋巴組織的細胞和許多異倍體體系的細胞屬于這一類型，他們需要附著于適量正電荷的固體或半固體的表面勝仗。
2、懸浮培養(yǎng)
來源于血液、淋巴組織的細胞，及許多腫瘤細胞（包括雜交瘤細胞）和某些轉(zhuǎn)化細胞等屬于懸浮培養(yǎng)型細胞，細胞為非貼壁依賴性細胞，無需支撐面，細胞或細胞聚集體懸浮于液體培養(yǎng)基中增殖。懸浮培養(yǎng)是大規(guī)模細胞培養(yǎng)的理想方式，可采用類似于微生物的方法進行懸浮培養(yǎng)。
3、固定化培養(yǎng)
動物細胞較微生物脆弱，易受剪切力等的影響，而細胞固定化技術(shù)可較好的保護細胞免受機械力及環(huán)境變化的影響，提高細胞的耐受力，促使細胞高密度培養(yǎng)，提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率。在傳統(tǒng)的固定化酶技術(shù)中，常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作為固定化細胞載體。但在動物細胞培養(yǎng)中，一般使用較溫和的固定方法，如吸附、包埋、中空纖維或膠囊化等，具有剪切力低、傳遞和抗污染能力強、細胞生長密度高、產(chǎn)物易于收集和分離純化等特點。
由于所培養(yǎng)的細胞的不同，固定化培養(yǎng)的方式也有不同，一般對于貼壁依賴性細胞通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯(lián)、包埋和微囊化等。
防止細胞培養(yǎng)出現(xiàn)污染的方法如下：
1、從培養(yǎng)箱取放細胞前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數(shù)。培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護服、口罩、手套缺一不可。操作前，準備好所有實驗所需物品，以減少走動，物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方，同時空留足夠操作空間。
3、操作時，試劑不用盡量及時蓋上蓋子，移至操作區(qū)外圍，盡量不要從開口容器上經(jīng)過。
4、使用移液槍時，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍桿碰觸瓶口及內(nèi)壁。一旦發(fā)生倒吸情況，要及時用酒精棉球擦拭，以免液體殘留導致細菌滋生。
5、凍存細胞時凍存管蓋子需擰緊。復(fù)蘇細胞時，從液氮罐取出凍存管，輕擰蓋子，以確認蓋子是否擰緊。
細胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細胞膜，模擬體內(nèi)生存環(huán)境，在無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下，使其生長繁殖并維持結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。目前細胞培養(yǎng)方式主要包括以下三種：
1、貼壁培養(yǎng)
貼壁培養(yǎng)主要適用于貼壁依賴性細胞。此類需要相互依賴，需貼附于不起化學作用的物質(zhì)（玻璃或塑料等無活性物質(zhì)）的表面生長、生存和維持，并終在附著面生長至單層，鋪滿平面時便會發(fā)生接觸抑制。大多數(shù)動物細胞，包括非淋巴組織的細胞和許多異倍體體系的細胞屬于這一類型，他們需要附著于適量正電荷的固體或半固體的表面勝仗。
2、懸浮培養(yǎng)
來源于血液、淋巴組織的細胞，及許多腫瘤細胞（包括雜交瘤細胞）和某些轉(zhuǎn)化細胞等屬于懸浮培養(yǎng)型細胞，細胞為非貼壁依賴性細胞，無需支撐面，細胞或細胞聚集體懸浮于液體培養(yǎng)基中增殖。懸浮培養(yǎng)是大規(guī)模細胞培養(yǎng)的理想方式，可采用類似于微生物的方法進行懸浮培養(yǎng)。
3、固定化培養(yǎng)
動物細胞較微生物脆弱，易受剪切力等的影響，而細胞固定化技術(shù)可較好的保護細胞免受機械力及環(huán)境變化的影響，提高細胞的耐受力，促使細胞高密度培養(yǎng)，提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率。在傳統(tǒng)的固定化酶技術(shù)中，常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作為固定化細胞載體。但在動物細胞培養(yǎng)中，一般使用較溫和的固定方法，如吸附、包埋、中空纖維或膠囊化等，具有剪切力低、傳遞和抗污染能力強、細胞生長密度高、產(chǎn)物易于收集和分離純化等特點。
由于所培養(yǎng)的細胞的不同，固定化培養(yǎng)的方式也有不同，一般對于貼壁依賴性細胞通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯(lián)、包埋和微囊化等。
防止細胞培養(yǎng)出現(xiàn)污染的方法如下：
1、從培養(yǎng)箱取放細胞前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數(shù)。培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發(fā)后再放入，以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護服、口罩、手套缺一不可。操作前，準備好所有實驗所需物品，以減少走動，物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方，同時空留足夠操作空間。
3、操作時，試劑不用盡量及時蓋上蓋子，移至操作區(qū)外圍，盡量不要從開口容器上經(jīng)過。
4、使用移液槍時，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍桿碰觸瓶口及內(nèi)壁。一旦發(fā)生倒吸情況，要及時用酒精棉球擦拭，以免液體殘留導致細菌滋生。
5、凍存細胞時凍存管蓋子需擰緊。復(fù)蘇細胞時，從液氮罐取出凍存管，輕擰蓋子，以確認蓋子是否擰緊。
