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培養(yǎng)基制備的操作步驟
發(fā)布時間:2014-03-10瀏覽次數(shù):1247返回列表
(一)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
1計算
根據(jù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的說明書了解營養(yǎng)瓊脂粉與水的比例,一般是1000 mL蒸餾水中應(yīng)加營養(yǎng)瓊脂粉31.3g,再根據(jù)培養(yǎng)基的需要量確定營養(yǎng)瓊脂粉的用量。
營養(yǎng)瓊脂粉的量=31.3×15×n/1000 (g)
其中:
15代表一個平板需要營養(yǎng)瓊脂約15 ml;
n代表要做的培養(yǎng)基平板的數(shù)量
2.稱量
用普通天平稱量出營養(yǎng)瓊脂粉的量,用量筒量出相應(yīng)的蒸餾水的量,要盡量。
3.溶化
將營養(yǎng)瓊脂粉和蒸餾水倒入搪瓷缸中,于電爐上加熱溶化,邊加熱邊攪拌,沸騰時立即從電爐上拿下,等泡沫消失后再放在電爐上加熱,注意不能讓瓊脂溢出,煮沸2—3次。 或選用培養(yǎng)基制備儀可使整個過程自動化進行。
4.倒平板或倒試管分裝
若做平板培養(yǎng)基應(yīng)倒于培養(yǎng)皿中,每板約15ml左右,以剛好覆蓋平皿底為易。若做斜面培養(yǎng)基應(yīng)倒入試管中,量為試管的1/3??蛇x用培養(yǎng)皿分裝儀,進行自動分裝。
5.滅菌:用高壓滅菌器滅菌
將平板培養(yǎng)基整齊地平放入高壓滅菌器的內(nèi)筒中,將試管口蓋上棉塞或橡膠塞,用紙包扎好,直立放入內(nèi)筒中,在121.3℃滅菌20-30min。如果選用自動分裝儀則自動滅菌裝置,可省略此步驟。
滅菌完畢后,將平板培養(yǎng)基拿出平放于桌面,凝固前勿動;將試管培養(yǎng)基擺成斜面,凝固前勿動。
6.無菌檢驗
隨機抽取幾個平板或試管培養(yǎng)基于溫箱中培養(yǎng)24小時,若無菌 生長則為合格。
7.備用
將合格的平板培養(yǎng)基和試管培養(yǎng)基放入冰箱,在0-4℃中保存?zhèn)溆?/p>
(二)血液瓊脂培養(yǎng)基。
將滅菌的營養(yǎng)瓊脂冷至45~50℃,以無菌操作,加入5%~10%的無菌血液(或脫纖維血),然后傾注平皿或分裝試管制成斜面。
(三)肉湯培養(yǎng)基
1.成分 牛肉膏3~5g,蛋白胨10g,氯化鈉5g,蒸餾水1000ml。
2.制法 將牛肉膏、蛋白胨、氯化鈉加蒸餾水后,加熱溶解。矯正pH至7.4~7.6,過濾分裝。置高壓蒸氣滅菌器內(nèi),121.3℃滅菌20min即成。
3.用途 可供一般細(xì)菌生長,同時也是制作一般培養(yǎng)基的基礎(chǔ)原料。供營養(yǎng)要求較高的細(xì)菌分離培養(yǎng),亦可供溶血性的觀察和保存菌種。
(四)半固體培養(yǎng)基
肉湯培養(yǎng)基中加入0.3%~0.5%瓊脂粉制成,用于菌種的保存或觀察細(xì)菌的運動性