（GB 4789.3-2010）

6操作步驟

6.1  樣品的稀釋

6.1.1 固體和半固體樣品：稱取25g樣品，放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000 r/min～l0000 r/min均質(zhì)1 min～2 min，或放入盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2 min，制成1：10的樣品勻液。

6.1.2液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL樣品置盛有225 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠）中，混勻，制成1：10的樣品勻液。

6.1.3樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時分別用1 mol/L NaOH或1 mol/L HCI調(diào)節(jié)

6.1.4用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1 mL，沿管壁緩緩注入9 mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1 mL無菌吸管反復吹打，使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。

6.1.5根據(jù)對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1 mL無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min。

8.2平板計數(shù)

8.2.1 選取2個～3個適宜的連續(xù)稀釋度，每個稀釋度接種2個無菌平皿，每皿1 mL。同時取1 mL生理鹽水加入無菌平皿作空白對照。

8.2.2及時將15 mL --20 mL冷至46℃的結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)約傾注于每個平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，將培養(yǎng)基與樣液混勻，待瓊脂凝固后，再加3  mL --4  mLVRBA覆蓋平板表層。翻轉(zhuǎn)平板，置于36℃土1 0C培養(yǎng)18 h～24 h。

8.3平板茵落數(shù)的選擇

    選取菌落數(shù)在15 CFU～150 CFU之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5 mm或大。