柱式真菌DNA提取試劑盒說明書
產(chǎn)品編號：BTN70901
規(guī)格：50T
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
本產(chǎn)品是真菌DNAout 的柱式升級產(chǎn)品，能夠破裂各種真菌堅(jiān)硬的外殼，同時(shí)使用硅膠膜DNA 純化技術(shù)，得到的DNA 適用于各種后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
1. DNA 純凈，OD260/280 一般都在1.9 左右、DNA 片段大小在30-50 Kb 左右，可直接用于PCR、酶切、雜交等。
2. 操作簡單，整個(gè)過程約15分鐘，比大多數(shù)同類產(chǎn)品短。
3. 安全，本試劑盒對人體，無腐蝕性和刺激性氣味。
4. 液體培養(yǎng)物處理量在0.1-3mL之間，真菌菌絲、孢子、子實(shí)體的處理量在0.1-0.5g之間。
5. 價(jià)廉物美，與國外同類產(chǎn)品相比質(zhì)量相當(dāng)，但價(jià)格。
規(guī)格及成分：
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成分 |
規(guī)格 |
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溶液A |
50ml |
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溶液B |
50ml |
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溶液C |
50ml |
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離心吸附柱 |
50套 |
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通用洗柱液 |
50ml |
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DNA洗脫液 |
10ml |
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說明書 |
1份 |
保存條件：
常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。
自備試劑：
氯fang。
使用方法：
1. 稱取0.1-0.5g 濕的真菌菌絲、孢子、子實(shí)體或0.1-3 mL 液體培養(yǎng)物離心得到的沉淀，轉(zhuǎn)移到塑料研缽中，液氮研磨成粉后轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的1.5 mL 塑料離心管中。
注意：zui好避免使用含二氧化硅的玻璃研缽，因?yàn)?/span>DNA 會吸附在表面，影響得率。如果菌絲或子實(shí)體等已經(jīng)十分干燥，則使用量zui好比上面推薦的使用量低5-10倍；如果需要預(yù)先從環(huán)境中對真菌進(jìn)行純化(如從血液病原真菌中提取DNA，則需要先去除紅細(xì)胞等成份，具體方法請參考相關(guān)文獻(xiàn)和相關(guān)產(chǎn)品的使用說明書，如紅細(xì)胞裂解液)。
2. 在離心管中加入1mL 65℃預(yù)熱的溶液A并用移液槍頭充分吹打混勻（如果溶液A有沉淀，需先在65℃加熱溶解后搖勻再使用）。
3. 65℃保溫5-30分鐘，其間zui好吹打混勻2-3次。
4. 12000-15000 g 室溫離心3分鐘。
5. 將不超過0.75 mL 的上清轉(zhuǎn)移到新離心管中。有時(shí)候上清液中還會有少量細(xì)小懸浮物，但對后續(xù)操作沒有影響，不必進(jìn)行特殊處理。
6. 在上清液中加入等體積的溶液B，上下顛倒30秒充分混勻，溶液將呈白色混濁狀。
7. 將其置于冰浴中放置5-10分鐘。
8. 12000-15000 g 室溫離心3分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的1.5mL塑料離心管中。
9. 加入0.2 mL 的氯fang(自備)，震蕩器上充分振蕩30秒混勻。
10. 12000-15000 g 室溫離心3分鐘，兩相交界面將有白色膜狀物，小心轉(zhuǎn)移上清到新1.5-5mL 塑料離心管中。注意：由于下一步要加1.5 倍體積的溶液C，所以新的離心管的體積要足夠大。
11. 加入1.5 倍體積的溶液C，上下顛倒30秒混勻，然后分多次的將混合液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。
12. 每次轉(zhuǎn)移0.7-0.8 mL 混合液后，室溫放置5-10分鐘。
13. 12000-15000 g 室溫1分鐘，棄穿透液。
14. 對需要多次上柱的樣品，可以在此將剩余的樣品加到離心吸附柱式中，重復(fù)第12-14 步的操作。
15. 將0.7 mL 通用洗柱液加入離心柱，室溫離心1分鐘，棄穿透液。
16. 在離心吸附柱中加入0.3 mL 的通用洗柱液，12000-15000g離心半分鐘（此步為第二次洗滌）。
17. 空甩1分鐘去除殘留液體。
18. 將離心柱放置在一新的1.5 mL 塑料離心管中，加入30-100μL通用洗脫液。
19. 室溫放置5分鐘后離心1分鐘，管底即為真菌DNA 溶液，可立即使用，也可長期保存在－20℃。
20. 可以重復(fù)上步一次，以洗脫更多的DNA。
